Sau khi xác định đƣợc nguồn nitrogen là bột đậu tƣơng có khả năng cảm ứng sinh endo-β-1,4-glucanase cao nhất trong số các nguồn nitrogen đƣợc khảo sát, bột đậu tƣơng đƣợc đƣa vào môi trƣờng với các nồng độ khác nhau: 0,1; 0,5; 1; 1,5; 1,8 và 2%. Sau 120 giờ nuôi cấy, endo-β-1,4- glucanase đƣợc chủng A. oryzae VTCC-F-045 sinh tổng hợp cao nhất
H o ạ t t í n h e n d o - β - 1 ,
(16,39 U/ml) ở nồng độ bột đậu tƣơng 1% cao hơn so 38% so với đối chứng. Bột đậu tƣơng ở
các nồng độ còn lại đều làm giảm sinh tổng hợp enzyme so với đối chứng,
giảm mạnh nhất ở nồng độ 0,5% (giảm 58%) (Hình 3.8 và Bảng 4.8). Bột đậu tƣơng nồng độ 1% thích hợp cho quá trình sinh tổng hợp endo- β-1,4- glucanase ở chủng A. oryzae VTCC-F-045. 150 100 50 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 Nồng độ bột đậu tương (%)
Hình 3.8. Ảnh hƣởng của nồng độ bột đậu tƣơng đến khả năng sinh tổng hợp
endo-β-1,4-glucanase của chủng A. oryzae VTCC-F-045
3.3.7. Nhiệt độ nuôi cấy
Chủng A. oryzae VTCC-F-045 đƣợc nuôi cấy ở các nhiệt độ khác nhau
28, 30 và 37°C trong môi trƣờng khoáng MTK có 0,4% lactose; 1% bột đậu tƣơng, lắc 200 vòng/phút, ở pH 6,5. Sau 120 giờ, nuôi cấy sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase đạt cao nhất (14,23 U/ml) ở nhiệt độ 28°C và giảm dần khi tăng nhiệt độ lên 30°C và 37°C. Giảm nhiều nhất ở nhiệt độ 37°C, hoạt tính đạt 5,86 U/ml (Hình 3.9 và Bảng 4.9). H o ạ t t í n h e n d o - β - 1 ,
120 80 40 0 28 30 37 Nhiệt độ
Hình 3.9. Ảnh hƣởng của nhiệt độ tới khả năng sinh tổng hợp enzyme endo-β-1,4-glucanase của chủng A. oryzae VTCC-F-045
Những nghiên cứu ở chủng A. niger cho thấy, cellulase đƣợc tạo ra nhiều nhất ở 28°C (Narasimha et al., 2006, Acharya et al., 2008) và 50°C thích hợp cho chủng A. niger NRRL-363 sinh tổng hợp cellulase (Hoàng Quốc Khánh et al., 2003). Ba chủng Trichoderma longi, A. niger và
Saccheromyces cerevisae có nhiệt độ tối ƣu là 45°C (Omojasola and Jilani, 2008). Các chủng nấm sợi ƣa ấm sinh tổng hợp cellulase mạnh nhất ở nhiệt độ
31-34°C (Đặng Minh Hằng, 1999). Trong khi đó nhiệt độ tối ƣu cho chủng Penicilium sp. DQT-HK1 là 30°C (Trịnh Đình Khá, 2006). Nhƣ vậy, ở nhiệt độ 28°C thích hợp để chủng A. oryzae VTCC-F-045 sinh tổng hợp endo-β-1,4- glucanase.