Nền mẫu huyết tương rất phức tạp, có chứa rất nhiều protein, các cation cơ bản như canxi, natri, magie. Các yếu tố này có ảnh hưởng rất lớn tới tín hiệu THC-COOH khi phân tích. Do vậy nếu mẫu không được xử lý tốt sẽảnh hưởng tới kết quả phân tích bằng LC-MS/MS. Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu nhằm đảm bảo việc phân tích không bịảnh hưởng hoặc ảnh hưởng của nền mẫu là có thể chấp nhận được đối với phương pháp đã nghiên cứu [25, 26].
Để đánh giá ảnh hưởng của nền mẫu, chuẩn bị mẫu huyết tương trắng thêm chuẩn ở các nồng độ 25 ng/ml; 100 ng/ml; 400 ng/ml và các mẫu chuẩn có nồng độ tương ứng. Chiết các mẫu theo quy trình xử lý mẫu đã
xây dựng, tiến hành ở điều kiện pH và dung môi như đã khảo sát ở trên ở mục 3.2.1 và 3.2.2. Dung dịch nội chuẩn 100 ng/ml được cho vào tất cả các mẫu sau khi đã được xử lý và chiết xuất. Tiến hành khảo sát trên thiết bị.
Ảnh hưởng của nền mẫu đến chất phân tích được thể hiện ở bảng 3.5.
Bảng 3. 5. Ảnh hưởng của nền mẫu
Hàm lượng (ng/ml) Ảnh hưởng của nền mẫu (%)
RSD (%)
5 -0,19 7,3
100 -0,18 6,4
400 -0,27 5,4
Kết quả khảo sát cho thấy, ở ba mức hàm lượng thấp, trung bình và cao của chất phân tích trong mẫu huyết tương cho ảnh hưởng của nền mẫu nằm trong khoảng ± 15 % và giá trị RSD (%) nhỏ hơn 15%. Như vậy, phương pháp xử lý mẫu phù hợp, nền mẫu ảnh hưởng chấp nhận được đến kết quả phân tích THC-COOH trong mẫu máu.
3.3. Thẩm định phương pháp và ứng dụng phân tích THC-COOH trong mẫu máu bằng LC-MS/MS