Thiết bị dùng phân tích trong đề tài này là LC-MS-MS của hãng Bruker- Mỹ. Máy được thiết kế giúp định lượng một cách tin cậy và hiệu quả cho hàng ngàn mẫu thực trong thời gian nhanh nhất có thể. Chế độ nguồn Ion hóa ESI MRM (-). Hệ thống sắc ký lỏng được vận hành ở chếđộ Gradient với tốc độ dòng 0,4 ml/ phút và áp suất tối đa 8000 PSI.
Các thí nghiệm khảo sát tìm điều kiện tối ưu của hệ thống LC-MS/MS được tiến hành với mẫu chuẩn và nội chuẩn được pha trong dung môi methanol.
- Khảo sát các mảnh phổ đặc trưng, lựa chọn mảnh ion định lượng của THC-COOH, THC-COOH-d3và các điều kiện khối phổ: Bơm trực tiếp 200 μl các dung dịch chuẩn đơn các chất THC-COOH và THC-COOH-d3 nồng độ 100 ng/ml vào buồng MS.
- Khảo sát, lựa chọn pha động:
Tiến hành khảo sát 3 hệ pha động hệ 1, hệ 2 và hệ 3 có khả năng tách, thời gian lưu phù hợp và cho các peak cân đối thuận lợi cho phân tích định
lượng. Các điều kiện khảo sát này được tham khảo từ các nghiên cứu trước đây [8, 19, 23]. Chuẩn bị hỗn hợp chuẩn và nội chuẩn 100 ng/ml, tiến hành khảo sát trên thiết bị. + Cột lựa chọn C18 100 mm x 2.1 mm ID 3 µm + Nhiệt độ cột: 400C + Nhiệt độ mẫu: 100C + Tốc độ dòng: 0,4 ml/p + Thểtích bơm mẫu: 2 µl + Tốc độ pha không đổi là 500 l/phút Hệ dung môi 1:
+ Mobile phase A (MPA): Amoniacetat 2 mM + Mobile phase B (MPB): ACN và MeOH (85:15) Hệ dung môi 2:
MPA: Amoniacetat 5 mM, MPB: ACN và MeOH (85:15) Hệ dung môi 3:
MPA: Amoniacetat 10 mM, MPB: ACN và MeOH (85:15)
Bảng 2. 1. Chương trình pha động gradient:
Thời gian (phút) A (%) B (%) 0.00 70 30 0.50 70 30 1.00 50 50 8.33 30 70 9.00 2 98 12.00 2 98 12.10 70 30 13.90 70 30