3.2. Phương pháp
3.2.2. Đánh giá khả năng đối kháng của các chủng xạ khuẩn đối với
khuẩn Erwinia sp. gây bệnh thối nhũn trên cây khoai mơn trong điều kiện phịng thí nghiệm (thí nghiệm 1)
Mục tiêu
Xác định khả năng đối kháng của các chủng xạ khuẩn đối với chủng vi khuẩn Erwinia sp. gây bệnh thối nhũn trên cây khoai môn trong điều kiện phịng thí nghiệm.
Phương pháp: Gồm 2 thí nghiệm :
- Thí nghiệm 2a: Đánh giá sơ khởi khả năng đối kháng của các chủng
xạ khuẩn với chủng vi khuẩn Erwinia sp. với 2 lần lặp lại. Sau đó, chọn ra các chủng xạ khuẩn có đối kháng với vi khuẩn Erwinia sp. để thực hiện thí nghiệm tiếp sau.
18
- Thí nghiệm 2b: Đánh giá khả năng đối kháng của các chủng xạ khuẩn
được chọn ra từ thí nghiêm 2a với chủng vi khuẩn Erwinia sp.
Bố trí thí nghiệm:
Cả 2 thí nghiệm được thực hiện với phương pháp giống nhau. Thí nghiệm được bố trí hồn tồn ngẫu nhiên một nhân tố, số nghiệm thức là số chủng xạ khuẩn.
Chuẩn bị:
Vi khuẩn Erwinia sp. được nuôi cấy trên đĩa petri chứa môi trường King’B trong 3 ngày, cho 5ml nước cất thanh trùng vào đĩa, thu được huyền phù, sau đó tiến hành điều chỉnh để đưa về huyền phù có OD600 bằng 0,3.
Nguồn xạ khuẩn được nuôi trong môi trường MS trong 7 ngày, cho 5 ml nước cất thanh trùng vào đĩa, rồi cạo lấy hết bào tử xạ khuẩn, lọc qua vải lược thu thành huyền phù xạ khuẩn. Thực hiện phương pháp pha loãng và chà đếm mật số trên mơi trường MS. Sau đó pha huyền phù xạ khuẩn về mật số 108cfu/ml cần dùng.
Thực hiện:
Hịa 100 µl huyền phù vi khuẩn (mật số 108 cfu/ml) cùng 10 ml môi trường King’B 16% (đã được để nguội 500C) vào đĩa petri, lắc đều, phơi đĩa để nguội. Sau đó tạo giếng trên đĩa petri bằng dụng cụ đục trịn có đường kính 5 mm, dùng micropipet hút 12 µl huyền phù xạ khuẩn (mật số 108 cfu/ml) cho vào giếng vừa đục, mỗi giếng là 1 chủng xạ khuẩn khác nhau. Mỗi đĩa bố trí 2 điểm cách đều nhau và cách thành đĩa là 1,5 cm. Đĩa petri được đặt trong điều kiện phịng thí nghiệm.
Chỉ tiêu theo dõi
Huyền phù xạ khuẩn A, B Môi trường King’B 16% có chứa huyền phù vi khuẩn
Hình 3.2. Sơ đồ minh họa thí nghiệm đánh giá khả năng đối kháng của các chủng xạ khuẩn đối với vi khuẩn Erwinia sp.
19
Tiến hành đo bán kính vịng vơ khuẩn ở các thời điểm 1, 2, 3, 5 và 7 sau ngày bố trí.