CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2. Nội dung nghiên cứu
2.3.1.3. Ảnh hưởng của nồng độ đường và điều kiện chiếu sáng đến sự tạo phôi trực tiếp từ
trực tiếp từ mô lá
Khảo sát nồng độ đường và điều kiện chiếu sáng thích hợp đến cảm ứng tạo phôi. Môi trường nuôi cấy được sử dụng là mơi trường khống có nồng độ của loại auxin (NAA/IBA); nồng độ BA (kế thừa kết quả từ hai thí nghiệm trên) có bổ sung sucrose với các nồng độ khác nhau (10, 30, 50, 70 g/L) và nuôi mẫu ở điều kiện chiếu sáng/tối. Ở điều kiện chiếu sáng, mẫu đặt dưới ánh sáng đèn huỳnh quang, chiếu sáng 12 giờ chiếu sáng/ngày, cường độ sáng ~ 4.000 lux; ở điều kiện tối mẫu đặt trong điều kiện tối hồn tồn.
Vật liệu ni cấy: mảnh lá kích thước 10 x 10 mm.
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hai yếu tố: yếu tố sucrose với 4 mức nồng độ khác nhau (10, 30, 50, 70 g/L), yếu tố điều kiện chiếu sáng với 2 mức sáng (4.000 lux)/tối. Cấy 5 mẫu/đĩa, 6 đĩa/lần lặp lại, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. Theo dõi, ghi nhận các chỉ tiêu tại thời điểm 60 NSC: tỷ lệ mẫu tạo phơi (%); số phơi/mẫu.
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hai yếu tố: yếu tố sucrose với 4 mức nồng độ khác nhau (10, 30, 50, 70 g/L), yếu tố điều kiện chiếu sáng với 2 mức sáng (4.000 lux)/tối. Cấy 5 mẫu/đĩa, 6 đĩa/lần lặp lại, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. Theo dõi, ghi nhận các chỉ tiêu tại thời điểm 60 NSC: tỷ lệ mẫu tạo phôi (%); số phôi/mẫu.
Vật liệu ni cấy: mảnh lá kích thước 10 x 10 mm.
Cấy 5 mẫu/đĩa, 6 đĩa/lần lặp lại, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. Các chỉ tiêu theo dõi được ghi nhận tại thời điểm 60 NSC gồm tỷ lệ mẫu tạo phôi (%); số phơi/mẫu. Thí nghiệm được bố trí hồn toàn ngẫu nhiên, theo kiểu đơn yếu tố.
2.3.1.5. Tạo cây con in vitro hồn chỉnh từ phơi vơ tính
Nhằm xác định mơi trường ni cấy thích hợp để tạo cây con in vitro hồn chỉnh, từ đó tạo cây con có thân, bộ lá, rễ tốt phục vụ việc trồng cây ra chậu đất.
Vật liệu ni cấy là các cây con có thân cao ~ 1 cm, đã có lá thật 3 – 4 mm (nguồn gốc từ phơi vơ tính).
Tách các cây con, ni cấy trên các đĩa petri có chứa 30 mL mơi trường ni cấy là MS hoặc ½MS, có chứa 20 g/L sucrose, khơng bổ sung chất ĐHST. Cấy 5 cây con/đĩa với 6 đĩa/lần lặp lại, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. Quan sát hình thái cơ bản,