Sau 30 ngày nuôi cấy, kết quả (Bảng 3 11) cho thấy, trong 03 loại kích thước phôi, với phôi có kích thước trung bình (~ 10 mm) tạo số phôi thứ cấp cao nhất (17,84) ở 30 NSC; ở phôi nhỏ và phôi to có số phôi thứ cấp là 7,51 và 13,92 Quan sát về hình thái của phôi thứ cấp nhận thấy phôi cấy ban đầu có kích thước nhỏ (~ 7 mm, Hình 3 25A), hầu như tạo phôi có dạng cầu (Hình 3 25B,C,D,E), còn phôi cấy
có kích thước trung bình (~ 10 mm, Hình 3 25F) phôi hình thành rất đa dạng, từ dạng cầu đến dạng có lá mầm (Hình 3 25G,H,I), với phôi cấy có kích thước lớn (~ 15 mm, Hình 3 25J) phôi hình thành có dạng có lá mầm (Hình 3 25K,L,M) Điều đó chứng tỏ, sự khác nhau về kích thước phôi cấy ban đầu có ảnh hưởng đến số phôi thứ cấp hình thành và sự phát sinh hình thái phôi thứ cấp Như vậy, ở NGBCC vật liệu sử dụng có kích thước trung bình (bước đầu có lá mầm) là thích hợp cho nhân phôi
Bảng 3 11 Ảnh hưởng của kích thước phôi đến sự tạo phôi thứ cấp, trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
Kích thước Số phôi thứ Đặc điểm hình thái, màu sắc phôi/cụm phôi phôi (mm) cấp ~7 ~ 10 ~ 15 7,51c* 17,84a 13,92b
Phôi nhỏ, thường có dạng cầu hình thành trên các bộ phận của phôi
Phôi to, nhiều dạng phôi khác nhau: dạng nốt tròn, dạng thon dài và dạng có lá mầm và hình thành trên các bộ phận của phôi Phôi to, thường ở dạng có lá mầm, hình thành trên các bộ phận của phôi
*Các chữ cái khác nhau trong một cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa ở mức p ≤ 0,05 trong phép thử LSD
Ảnh hưởng của kích thước phôi đến sự tạo phôi thứ cấp đã được nghiên cứu trên một số đối tượng cây trồng Phôi hợp tử Brassica oleracea (var gongylodes) ở giai đoạn mới có lá mầm là vật liệu nuôi cấy cho tỷ lệ tạo phôi thứ cấp cao (80,7%) khi được nuôi cấy trên môi trường không có chất điều hòa sinh trưởng [159] Phôi vô tính giai đoạn thủy lôi của dòng cà phê Arabica Arabica (AS2K) tạo phôi thứ cấp tốt trên môi trường MS (đặc và bán rắn) có bổ sung Thidiazuron ở nồng độ 9,08 μM [160] Corredoira và cộng sự (2015) sử dụng phôi vô tính giai đoạn có lá mầm và cụm phôi cầu và thủy lôi Eucalyptus globulus và E saligna × E maidenii nuôi cấy trên môi trường có 16,11 µM NAA nhằm phát triển sinh khối [161] Tuy nhiên, đối với Malus x domestica Borkh (cv 'Gloster 69'), phôi vô tính kích thước to lại cho tỷ lệ tạo phôi thứ cấp cao (> 73%) khi được nuôi cấy trên môi trường có tổ hợp
Hình 3 25 Ảnh hưởng của kích thước phôi đến sự tạo phôi thứ cấp trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
A Phôi kích thước nhỏ dùng nuôi cấy; phôi thứ cấp hình thành trên thân phôi (B,C), rễ (D), lá (E) (vị trí mũi tên) F Phôi kích thước trung bình dùng nuôi cấy; phôi thứ cấp hình thành trên thân phôi (G), rễ (H), lá (I) J Phôi kích thước to dùng nuôi cấy; phôi thứ cấp hình thành trên thân phôi (K), rễ (L), lá (M)