Ở 30 NSC, kết quả (Bảng 3 12) cho thấy, KLT phôi đạt giá trị cao nhất (4,67 g) và hệ số nhân phôi cũng đạt cao nhất 15,57 ở môi trường nuôi cấy SH có bổ sung 50 g/L sucrose Nghiệm thức có nồng độ sucrose thấp (20 g/L) KLT phôi thu nhận được là thấp nhất (2,14 g) phôi có màu xanh, lá mầm to, rễ dài so với phôi trong môi trường có nồng độ sucrose cao (40 – 50 g/L) - phôi màu hơi vàng, lá mầm nhỏ, và rễ ngắn (Hình 3 26)
Bảng 3 12 Ảnh hưởng của nồng độ đường đến sự tăng trưởng sinh khối phôi trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
Nồng độ KLT phôi Hệ số Đặc điểm hình thái, màu sắc sucrose (g/L) thu nhận (g) nhân phôi cụm phôi
20 2,14d* 7,29d Cụm phôi màu xanh, phôi có lá
mầm to, rễ dài
30 2,87c 9,57c Cụm phôi màu xanh, phôi có lá
mầm to, rễ dài
40 3,56b 11,87b Cụm phôi màu hơi vàng, phôi có
lá mầm nhỏ, rễ ngắn
50 4,67a 15,57a Cụm phôi màu hơi vàng, phôi có
lá mầm nhỏ, rễ ngắn
*Các chữ cái khác nhau trong một cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa ở mức p ≤ 0,05 trong phép thử LSD
Hình 3 26 Ảnh hưởng của nồng độ đường đến sự tăng sinh khối phôi, trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
A,B,C,D Sự phát sinh phôi thứ cấp trong môi trường có nồng độ sucrose 20, 30, 40, 50 g/L
Naing và cộng sự (2013) kết luận cảm ứng tạo phôi thứ cấp Chrysanthemum
cv Euro tốt hơn trên môi trường (MS có 2 mg/L 2,4-D, 2 mg/L kinetin) có 60 g/L đường so với 30 g/L [75] Ngược lại, phôi thứ cấp Panax ginseng phát sinh trên môi trường MS, không có chất điều hòa sinh trưởng, với nồng độ đường tương đối thấp (20 - 30 g/L); và nồng độ 20 g/L kích thích sự phát triển tiếp tục của phôi nhưng nồng độ 30 g/L gây hạn chế dù kích thích tăng sinh khối [73] Tương tự, Al Shamari và cộng sự (2018) kết luận phôi thứ cấp Brassica oleraceae var Botrytis phát sinh tốt từ trụ dưới lá mầm phôi sơ cấp cũng trên môi trường bán rắn MS (không bổ sung chất
điều hòa sinh trưởng) có 30 g/L đường [163] Nhìn chung, sự phát triển sinh khối phôi NGBCC có nhu cầu về đường khá cao – tương tự một số trường hợp nêu trên
3 2 2 5 Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến sự tăng trưởng sinh khối phôi
Kết quả cho thấy (Bảng 3 13, Hình 3 27), cường độ ánh sáng 2 000 - 4 000 lux đã có ảnh hưởng tích cực đến sự tăng trưởng sinh khối phôi so với nuôi phôi trong điều kiện tối Hệ số nhân phôi ở nghiệm thức tối, 2 000 lux và 4,000 lux lần lượt là 8,42; 9,37 và 10,40 Nói chung, phôi nuôi ngoài sáng xanh hơn phôi nuôi trong tối Phôi là cấu trúc mang nhiều lục lạp nên thường được nuôi cấy trong điều kiện có chiếu sáng Naing và cộng sự (2013) đã thực hiện nuôi cấy phôi sơ cấp
Chrysanthemum cv Euro (môi trường MS có 2 mg/L 2,4-D và 2 mg/L kinetin) nhằm tạo phôi thứ cấp ở điều kiện chiếu sáng cao 60 - 100 µmol m-2 s-1 (~ 4 500 – 7 500 lux) (16 h sáng : 8 h tối) [75] Sử dụng cường độ ánh sáng 80 µmol m-2 s-1 (~ 6 000 lux), 40 µmol m-2 s-1 (~ 3 000 lux) đối với nuôi cấy tạo phôi thứ cấp Brassica oleracea
var Botrytis [163], Polyscias filicifolia [54], theo thứ tự, cũng đã được ghi nhận Ngược lại, ở tạo phôi thứ cấp Quercus robur, nuôi cấy được thực hiện trong cùng điều kiện tối [76] như nuôi cấy vật liệu phôi sơ cấp Ở NGBCC, nuôi nhân phôi ở điều kiện ánh sáng cao đã thúc đẩy sự hình thành phôi thứ cấp dẫn đến tăng sinh khối tốt – phù hợp với tình hình chung về bố trí điều kiện sáng khi dùng vật liệu chứa nhiều lục lạp
Bảng 3 13 Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến sự tăng trưởng sinh khối phôi, trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
Cường độ ánh KLT phôi Hệ số Đặc điểm hình thái, màu sắc sáng (lux) thu nhận (g) nhân phôi phôi
0 (tối) 2,53c* 8,42c Phôi màu hơi vàng, lá mầm nhỏ, rễ phôi nhiều, dài 2 000 2,81b 9,37b Phôi màu xanh, lá mầm to, rễ
phôi trung bình
4 000 3,12a 10,40a Phôi màu xanh, lá mầm to, rễ phôi ít, ngắn
*Các chữ cái khác nhau trong một cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa ở mức p ≤ 0,05 trong phép thử LSD
Hình 3 27 Ảnh hưởng của điều kiện chiếu sáng đến sự tăng trưởng sinh khối phôi, trong môi trường lỏng SH, 30 NSC
A Phôi nuôi trong tối (ĐC); B,C Phôi nuôi ngoài sáng cường độ 2 000 lux, 4 000 lux; D,E Cận cảnh phôi nuôi trong tối, ánh sáng 4 000 lux