Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.2.3. Xác định đường cong sinh trưởng của vi rút DTL
Do vi rút không gây bệnh tích tế bào, chính vì vậy không thể quan sát bệnh tích bằng kính hiển vi thông thường. Do đó để xác định chính xác thời điểm thu hoạch vi rút tôi ưu, chúng tôi tiến hành lấy mẫu tại các thời điểm 24h, 36h, 48h, 60h, 72h, 80h, 96h,108h, 120h sau đó chuẩn độ hiệu giá và xác định sự có mặt của
vi rút DTL bằng phản ứng IFA. Kết quả theo dõi thí nghiệm được trình bày tại bảng 4.14.
Bảng 4.14. Kết quả hiệu giá vi rút DTL qua các thời điểm thu hoạch Thời điểm thu hoạch vi rút (giờ) Lần 1 Hiệu Lần giá 2 vi Lần rút 3 TB
Hình 4.12. Đường cong sinh trưởng của vi rút DTL
Qua bảng số liệu và đồ thị sinh trưởng, phát triển của vi rút DTL cho thấy: Sau gây nhiễm 24 giờ vi rút bắt đầu qúa trình sinh trưởng, hàm lượng vi rút phát triển tăng dần theo thời gian nhiễm và đạt cao nhất vào khoảng 72 – 84 giờ sau gây nhiễm (107.13±0,2TCID50/ml.). Sau thời điểm 96 giờ, hiệu giá vi rút giảm nhanh chóng. Đến thời điểm 120 giờ sau gây nhiễm hiệu giá vi rút chỉ còn 104,57±0,1 TCID50/ml. Từ đó chúng tôi rút ra kết luận: thời điểm thu hoạch vi rút tốt nhất là 72 giờ sau gây nhiễm. Tại thời điểm này hàm lượng vi rút đạt cao nhất và hiệu giá vi rút ổn định nhất.
Sau đây là hình ảnh bệnh tích của vi rút DTL trên tế bào PK 15 khi nhuộm bằng phản ứng IFA:
Hình 4.13. Hình ảnh nhuộm IFA của vi rút DTL
Sau khi chốt các thông số cho quy trình thu hoạch vi rút trên hệ thống Microcarrier. Tôi tiến hành so sánh với hiệu giá vi rút thu được trên hệ thống Microcarrier với hệ thống T-flask đã được công ty áp dụng sản xuất trước đó. Kết quả được thể hiện qua đồ thị sau:
Hình 4.14. So sánh hiệu suất nuôi cấy vi rút trên hệ thống Microcarrier và T- flask
Nhìn vào hình 4.14 ta nhận thấy hiệu giá vi rút DTL thu được khi sản suất trên công nghệ Microcarrier cao nhất thu được tại thời điểm 72 giờ là 107.17 TCID50/ml trong khi hiệu giá vi rút cào nhật khi nuôi cấy trên Tflask thu được tại thời điểm 96h sau gây nhiễm là 106.3 TCID50/ml. Như vậy hiệu giá vi rút Dịch tả lợn khi nuôi cấy trên Microcarrier cao hơn T-flask gấp 7,4 lần. Mặt khác, khi sử dụng công nghệ Microcarrier còn giảm thiểu nhận lực làm việc, giảm thiểu tạp