- Chiết l ng ậl ng với nhexane
N hn xét: Da trên kết quả đ nh tính thành phần hóa hc các phân đon cao của r cây Đ i tướng quânhoa trắng ta thấy chúng có chứa các nhóm chức a lkaloid,
3.5.2. Kết quả chạy sắc ký cột phân đoạn cao hexane tách từ tổng cao
ethanol
Xuất phát từ kết quả phân đo n cao hexane (kí hiệu TNH) có lư ng cao tương đối nhiều và có nhiều vếtchất xuất hiện trên bản m ng rất rõ ràng, đ c trưng nên đư c tiếp tục nghiên cứu nh m phân tách, làm giàu và đ nh danh các chất chủ yếu có m t trong nó.
a. Kết quả chạy sắc ký cột phân đoạn cao hexane TNH
Lấy 5,92g phân đo n cao hexane (TNH) tiến hành phân lập trên cột sắc ký silica gel. Sử dụng cột sắc ký có d = 3,5 cm, h = 50 cm, lư ng silica gel cho vào cột là 150g, dung môi n đ nh cột là hexane, hệ dung môi rửa giải hexane : ethyl acetate (kh i đầu với t lệ 2:8 và kết thúc b ng t lệ 6:4).
Hình 3.12. Sắc ký cột phân đoạn cao hexane của cây Đại tướng quân hoa trắng Kết quả giải ly thu đư c 280 bình (15ml/bình). D a theo kết quả thu đư c từ sắc ký bản m ng ta gộp l i thành 5 phân đo n, kí hiệu lần lư t là: TNH1, TNH2, TNH3, TNH4 và TNH5.
Phân đo n TNH1: 0,67g Phân đo n TNH2: 2,07g Phân đo n TNH3: 1,55g Phân đo n TNH4: 0,73g Phân đo n TNH5: 0,83g
Hình 3.13. Các phân đoạn thu được khi sắc ký cột phân đoạn cao hexane của cây
Đại tướng quânhoa trắng
b. Kết quả chạysắc ký cột phân đoạn TNH2
Phân đo n TNH2 có lư ng cao nhiều (2,07g) và các h p chất phân biệt rõ trên SKBM (Hình 3.14) nên đư c khảo sát tiếp.
Hình 3.14. Sắc kýbản mỏng của các bình hứng gộp thành phân đoạn TNH2
Sử dụng cột sắc ký có d = 1,5cm, h = 90cm và lư ng silica gel cho vào cột là 67,0g, kh i đầu dung dung môi rửa giải là dicloromethane, sau đó kết thúc b ng ethyl acetate. Thể tích mỗi bình hứng là 15ml, tốc độ giải ly khoảng 1,0ml/phút.
Hình 3.15. Sắc ký phân đoạn TNH2
Các bình hứng sau khi đư c làm bay hơi bớt dung môi và kiểm tra b ng sắc ký bản m ng. Kết quả đư c thể hiện trên Hình 3.16 và Hình 3.17
Hình 3.16. Sắc ký bản mỏng các bình hứng giải ly bằng dichloromethane
Hình 3.17. Sắc ký bản mỏng các bình hứng giải ly bằng ethyl acetate
D a trên SKBM ta gộp đư c 6 phân đo n kí hiệu lần lư t là: TNH.2.1 (90mg), TNH.2.2 (130mg), TNH.2.3 (70mg), TNH.2.4 (140mg), TNH.2.5 (260mg), TNH.2.6 (240mg).
Hình 3.18. Các phân đoạn thu được khi sắc ký cột phân đoạn TNH2 + Từ phân đo n TNH.2.1 tiến hành tinh chế thu đư c mẫu ch có một vết chất duy nhất trên SKBM, kí hiệu là TNH.2.1a. Mẫu TNH.2.1a được đem đo GC-
MS để xác định thành phần.
+ Từ phân đo n TNH.2.6 tiến hành tinh chế thu đư c mẫu ch có một vết chất duy nhất trên SKBM, kí hiệu là TNH.2.6a. Mẫu TNH.2.6a được đem đo GC-
MS để xác định thành phần
+ Trên phân đo n TNH.2.4 có vết 2 vết chất màu xanh và màu đen phân biệt rất rõ. Do đó ta ch n phân đo n TNH.2.4 tiến hành sắc ký cột với hy v ng tách riêng 2 cấu tử màu xanh và màu đenra kh i nhau.
c. Kết quả chạy sắc ký cột phân đoạn TNH.2.4
Phân đo n TNH.2.4 (140mg) có 2 h p chất cần phân lập (khi đ nh tính b ng sắc ký bản m ng) đư c tiếp tục khảo sát.
Hình 3.19. Cao phân đoạn TNH.2.4 và SKBM của nó giải ly bằng ethyl acetate, hexane và chloroform
Cao phân đo n TNH.2.4 trộn với 2g silica gel và nghiền m n. Sử dụng cột sắc ký có d = 1,5cm, h = 45cm và lư ng silica gel cho vào cột là 20g, triển khai ch y với dung môi chloroform (d a vào kết quả ch y sắc ký bản m ng), cho ch y cột với tốc độ hứng 4-5 gi t/ phút. Quá trình sắc ký phân đo n TNH.2.4 đư c thể hiện như Hình 3.20.
Hình 3.20. Quá trình sắc ký phân đoạn TNH.2.4 (a) - trước khi giải ly; (b) - đang giải ly và (c) - sau khi giải ly
Kết quả sau khi ch y sắc ký cột phân đo n TNH.2.4 với dung môi rửa giải chlorofrom thu đư c 6 bình, ký hiệu từ TNH.2.4.1 đến TNH.2.4.6.
Hình 3.21. Kết quả thu được khi sắc ký phân đoạn TNH.2.4
Kết quả sắc ký bản m ng cho kết quả ch bình hứng thứ tư (kí hiệu mẫu TNH.2.4.4) cho 2 vết của hai cấu tử vẫn chưa tách riêng ra đư c, các bình còn l i không xuất hiện vết chất. Mẫu TNH.2.4.4 được đem đo GC-MS để định danh thành phần hóa học.
3.5.3. K t qu đ nh danh các ch t trong phơn đo n cao hexane tách t t ng cao ethanolc a ph n thơn cây Đ i t ng quơnhoa tr ngb ng GC-MS