Lấy 12,0g cao BuOH hòa tan vào dung môi BuOH trong bình cầu 250ml, sau khi chấm bản mỏng để tìm hệ dung môi thích hợp để chạy cột, ta thêm silica gel (khoảng 15g) vào, quay cất dưới áp suất thấp đến khô hoàn toàn để
chất gắn đều lên silica gel. Làm tơi mịn phần silica gel đã gắn bằng cối và chày sứ để nạp vào cột sắc ký.
üChuẩn bị cột sắc ký
Cho hệ dung môi DCM:MeOH:H2O = 4:1:0,1 vào ca nhựa (lựa chọn dựa vào sắc ký bản mỏng).
Lượng silica gel (Merck, 0,04 – 0,063 mm) lấy khoảng 120g cho vào ca nhựa trên và khuấy.
Cho mẫu bông nhỏ vào đáy cột.
Silica gel được cho vào cột bằng cách nhồi ướt.
üNạp mẫu vào cột
Mẫu được nạp vào cột theo phương pháp khô. Mẫu khô đã tơi mịn được
đưa vào cột sắc ký từ từ thông qua phễu sau khi đã khóa cột. Chú ý khi cho mẫu vào cột theo phương pháp khô thì lượng dung môi phải vừa đủ, không quá nhiều; lượng mẫu phải dàn trải đều một lớp mỏng trên bề mặt silica gel; mẫu phải thấm ướt đều dung môi, không có bọt khí.
üChạy cột silica gel với hệ dung môi DCM/MeOH/H2O với tỷ lệ độ
phân cực tăng dần từ 4:1:0,1 đến 2:1:0,1, thu được 10 phân đoạn được ký hiệu từ F1 đến F10 với tổng lượng chất 9g.
Trong đó, một số phân đoạn có vệt rõ, xuất hiện chất khi chạy thử trên sắc ký bản mỏng, đó là các phân đoạn F3, F4, F5, F6, F9 và F10. Dựa vào bản mỏng, ta thấy các phân đoạn F4 và F5 có nhiều vệt chất với Rf tương đối giống nhau nên được chọn để tiếp tục chạy sắc ký.