Phương pháp đánh giá khả năng kháng khuẩn

P. aeruginosa

3.4.3. Phương pháp đánh giá khả năng kháng khuẩn

a. Phương pháp khuếch tán qua giếng thạch Tiến hành thí nghiệm:

Các thao tác được thực hiện trong tủ cấy vô trùng. Ria cấy vi khuẩn mỗi loại trên mặt thạch MHA đã khô ổn định (nồng độ tế bào 106 vi khuẩn/ ml), sau đó làm khô trong tủ ấm khoảng 15 phút chờ khô bề mặt, đục lỗ giếng, nhỏ 200µl dung dịch dịch chiết vào giếng và đặt khoanh giấy kháng sinh đè nhẹ để đĩa giấy cố định trên mặt thạch (để ở nhiệt độ phòng 30 phút). Chuyển các đĩa petri vào tủ ấm và đọc kết quả đường kính vòng vô khuẩn sau 16 - 18 giờ.

b. Nội dung phương pháp

Đem rửa sạch 9 đĩa petri và sau đó bọc giấy, đem sấy ở nhiệt độ 120C trong 2 tiếng. Pha môi trường thạch MHA- nước cất theo tỷ lệ 38g - 1000ml. Đem môi trường vừa pha đi đo và điều chỉnh độ pH 7,2 -7,4 (có thể dùng HCl 1% hoặc NaOH 1% để điều chỉnh pH), sử dụng máy đo pH để kiểm tra độ pH của môi trường MHA. Mang đi hấp môi trường ở nhiệt độ 121C trong 15 phút. Sau khi hấp xong, làm nguội môi trường đến nhiệt độ phòng, đổ môi trường vào 9 đĩa petri đã vô khuẩn với độ dày từ 3,5mm – 4,5mm và để trong tủ ấm.

Các thao tác ria cấy vi khuẩn được thực hiện trong tủ cấy vô trùng và trên ngọn lửa đèn cồn, sử dụng que cấy vi sinh tiệt trùng ria cấy vi khuẩn mỗi loại (lấy trực tiếp từ mẫu bệnh phẩm đã có kết quả kháng sinh đồ) trên mặt thạch MHA đã khô ổn định (nồng độ tế bào 106 vi khuẩn/ml), mỗi loại chủng khuẩn với 03 lần lặp. Sau đó làm khô trong tủ ấm khoảng 15 phút chờ khô bề mặt, mỗi 1 đĩa petri đục 2 lỗ giếng, mỗi lỗ giếng có đường kính 8mm, chiều cao 4mm, sử dụng micropipet nhỏ 200µl dung dịch dịch chiết Mảnh cộng vào một giếng, giếng còn lại cũng sử dụng micropipet nhỏ 200µl nước cất, đặt khoanh giấy kháng sinh đè nhẹ để khoanh giấy cố định trên mặt thạch (để ở nhiệt độ phòng 30 phút). Sử dụng đối chứng âm là nước cất và đối chứng dương là khoanh giấy kháng sinh. Lật ngược đĩa, chuyển các đĩa petri vào tủ ấm và đọc kết quả đường kính vòng vô khuẩn sau 16 - 18 giờ.

Đường kính vòng vô khuẩn (D - d) được xác định bằng đường kính vòng kháng khuẩn ngoài trừ đi đường kính giếng thạch dịch chiết.

D : Đường kính vòng kháng khuẩn Giếng nước cất d : Đường kính giếng thạch dịch chiết Khoanh giấy kháng sinh Đĩa petri có sẵn môi trường

và vi khuẩn

Phần 4

KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN