6. BỐ CỤC CỦA LUẬN VĂN
2.6.PHÂN LẬP CHẤT TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM
Trong luận văn này chúng tôi nghiên cứu phân lập và tinh chế chất trong cao chiết chloroform l diếp c .
Cao chiết chloroform đƣợc t ch và tinh chế ằng sắc kí cột thƣờng kết hợp sắc kí ản mỏng silicagel.
Để phân lập và tinh chế chất chúng tôi sử dụng:
- Sắc kí ản mỏng TLC Silicagel 60 F254 hãng Merck, dày 0.25mm tráng trên nền nhôm.
- Silicagel nhồi cột là silicagel Merck cỡ hạt 0.04 - 0.06mm.
- Cột sắc kí là ống thủy tinh có kích thƣớc 2 cm x 80 cm ên dƣới có van khóa.
- Thuốc thử phun lên ản mỏng sử dụng vanilin 1% trong dung dịch methanol – H2SO4 đặc sau đó sấy ản mỏng ở nhiệt độ khoảng 1100C.
Chu n bị thuốc thử: Lấy vào bình tam giác 200ml MeOH, thêm 25 ml CH3COOH làm lạnh hỗn hợp. Sau đó thêm từ từ 11ml H2SO4 đậm đặc. Cân 1.2 g vanilin. Cho từ từ từng lƣợng nhỏ vanilin vào hỗn hợp trên vừa dùng đ a thủy tinh khuấy đều.
Lựa chọn dung môi chạy cột sắc kí
Để lựa chọn dung môi hay hệ dung môi chạy cột sắc kí silicagel dựa vào sắc kí ản mỏng với c c ƣớc sau:
+ Hoà tan hoàn toàn một lƣợng nhỏ mẫu trong dung môi CHCl3.
+ Chuẩn ị 5 tấm ản mỏng rồi dùng ống mao quản chấm dung dịch mẫu trên lên mỗi tấm với lƣợng tƣơng đƣơng nhau.
+ Mỗi ản mỏng đƣợc chạy với loại dung môi có độ phân cực kh c nhau: n- hexan/EtOAc (với c c tỉ lệ 95:5, 90:10, 85:15), CHCl3/MeOH (99:1), CHCl3/CH3COCH3 (8:2). Tiếp theo hiện hình ằng thuốc thử. Bản mỏng nào có sự t ch vệt rõ ràng c c vệt nằm trong khoảng 1/3 đến 2/3 chiều dài ản mỏng thì hệ dung môi tƣơng ứng đó là thích hợp để chạy cột sắc kí.
Sau khi thử nghiệm chấm ản mỏng với các hệ dung môi khác nhau, chúng tôi đã tìm thấy hệ dung môi phù hợp là n-hexan/EtOAc.
Chu n bị cột sắc kí
Cố định cột trên gi . Cho một lớp ông mỏng vào đ y để ngăn không cho silicagel chảy xuống ình hứng.
Để việc t ch chất đƣợc tốt silicagel phải đƣợc nạp vào cột một c ch đồng nhất để hạn chế việc nứt cột ất thƣờng. Silicagel đƣợc nhồi vào cột sắc kí theo phƣơng ph p nhồi sệt.
Cho hệ dung môi n–hexan: EtOAc = 95 : 5 vào cốc thủy tinh (lựa chọn dựa vào sắc kí ản mỏng).
Lấy 150 gam silicagel cho từ từ từng lƣợng nhỏ vào cốc đựng hệ dung môi trên vừa khuấy đều để đuổi hết ọt khí thu đƣợc một hỗn hợp sệt đồng nhất để nhồi vào cột sắc kí.
Rót hỗn hợp sệt vào cột qua một phễu lọc và mở nhẹ kho để dung môi chảy xuống ình hứng (dung môi này tiếp tục đƣợc dùng để rót trở lại đầu cột). Tiếp tục rót hỗn hợp vào cột đến hết số lƣợng vừa rót vừa gõ nhẹ thành cột ằng thanh cao su để silicagel n n đều trong cột.
Sau khi nạp xong cho dung môi chảy đều qua cột hai a lần để cột đƣợc đồng nhất. Nhất thiết không để đầu cột ị khô nghĩa là luôn luôn có dung môi phủ trên phần đầu cột. Sau khi nạp cột xong mặt tho ng silicagel phải phẳng.
Nạp mẫu vào cột
CHƢƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH CÁC THÔNG SỐ HÓA LÝ 3.1.1. Độ ẩm
Bằng phƣơng ph p trọng lƣợng độ ẩm của l diếp c tƣơi và của nguyên liệu ột khô đƣợc x c định và tổng hợp ở ảng 3.1và ảng 3.2.
Bảng 3.1. Kết quả xác định độ m của lá diếp cá tươi
STT m1(g) m2 (g) m3 (g) (%) TB (%)
1 95. 82 5.01 97.23 71.87
71.82
2 93.32 5.04 94.74 71.83 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3 97.17 5.03 98.58 71.77
Bảng 3.2. Kết quả xác định độ m của nguyên liệu bột khô lá diếp cá
STT m1 (g) m2 (g) m3 (g) (%) TB (%) 4 92.99 5.02 97.74 5.38 5.32 5 90.21 5.00 94.94 5.40 6 95.89 5.01 10.64 5.19 Trong đó: m1 : Khối lƣợng ch n sứ
m2 : Khối lƣợng mẫu l diếp c
m3 : Khối lƣợng ch n sứ và mẫu l diếp c sau khi sấy (%) : Độ ẩm của mỗi mẫu
TB (%) : Độ ẩm trung bình
Nhận xét:
- Độ ẩm trung bình của mẫu l diếp c là 71.82%. Cây diếp c là loài mọng nƣớc nên độ ẩm của mẫu l diếp c tƣơng đối cao. Độ ẩm thay đổi tùy thuộc vào
điều kiện khí hậu thổ nhƣỡng nơi cây sống đời sinh trƣởng. Với việc tích l y lƣợng nƣớc lớn giúp cây diếp c có thể sinh tồn đƣợc ở những vùng khác nhau.
- Độ ẩm trung bình của nguyên liệu ột là 5.32%. Nguyên liệu khô r o s hạn chế sự ph t triển của c c vi sinh vật nên thuận lợi cho việc ảo quản nguyên liệu. Với độ ẩm này chúng tôi đã ảo quản nguyên liệu trong thời gian dài nhƣng không ị mốc nguyên liệu có độ ẩm ổn định tốt.
3.1.2. Hàm lƣợng tro
Bằng phƣơng ph p trọng lƣợng hàm lƣợng tro của nguyên liệu đƣợc x c định và tổng hợp ở ảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả xác định hàm lượng tro trong lá diếp cá
STT m1 (g) m2 (g) m3 (g) m4 (g) mtro (g) H(%) Htb(%) 1 30.726 35.728 5.002 35.625 0.103 2.059 2.091 2 33.429 38.435 5.006 38.329 0.106 2.117 3 30.186 35.195 5.009 35.090 0.105 2.096 Trong đó: m1 : khối lƣợng cốc
m2 : khối lƣợng cốc và mẫu trƣớc khi tro ho m3 : khối lƣợng mẫu
m4 : khối lƣợng cốc và mẫu sau tro ho H (%) : hàm lƣợng tro trong l diếp c
Nhận xét:
Hàm lƣợng tro trung bình trong l diếp c là 2.091%. Điều này dự o hàm lƣợng kim loại có trong mẫu lá diếp c là ít.
3.1.3. Hàm lƣợng kim loại
a. X c định hàm lƣợng một số kim loại nặng
Mẫu l diếp c sau khi tro ho đƣợc hoà tan ằng dung dịch HNO3 đặc 65- 68% và định mức đến 250 ml. Lấy dung dịch đã định mức trên đem x c định hàm lƣợng một số kim loại nặng là P Cu Zn As ằng phƣơng ph p quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) tại ph ng thí nghiệm phân tích môi trƣờng – Đài khí tƣợng thủy
Công thức chuyển đổi từ hàm lƣợng mg/l sang hàm lƣợng mg/kg nhƣ sau: (mg/l) (mg/kg) C C 250 5, 025
Trong đó m0 : khối lƣợng mẫu l diếp c trƣớc khi tro hóa
Hàm lƣợng một số kim loại trong l diếp c đƣợc x c định ằng phƣơng ph p đo AAS. Kết quả đƣợc tổng hợp ở ảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả xác định hàm lượng kim loại trong lá diếp cá
TT Kim loại Phƣơng pháp thử (AAS) Kết quả (mg/l) Kết quả (mg/kg) Hàm lƣợng cho phép (mg/kg) 1 Pb TCVN 6193:1996 0.0425 0.8458 2 2 Cu TCVN 6193:1996 0.3799 7.5423 20 3 Zn TCVN 6193:1996 0.7667 15.2580 20 4 As TCVN 6826:2000 0.0098 0.1950 1 Nhận xét:
Kết quả phân tích cho thấy hàm lƣợng kim loại nặng nhƣ Arsen Cadmin Crom không phát hiện. Hàm lƣợng kim loại của Cu là 7.5423mg/kg, As là 0.1950mg/kg, Pb là 0.8458mg/kg. Zn là 15.2580mg/kg. Căn cứ vào quyết định của Bộ Y Tế số 505/BYT-QĐ ngày 13 th ng 4 năm 1992 về một số tiêu chuẩn về vệ sinh thực phẩm cho hàm lƣợng kim loại nặng tối đa cho ph p trong rau củ quả sấy khô đối với Cu: 20mg/kg, Pb:2mg/kg, Zn: 20mg/kg thì chúng tôi nhận thấy hàm lƣợng kim loại trong lá diếp cá không gây ảnh hƣởng đến sức khỏe. Tuy nhiên do ảnh hƣởng của điều kiện sinh thái, thời tiết mà hàm lƣợng kim loại trong lá diếp cá trồng ở c c địa phƣơng theo từng thời gian lấy mẫu có thể khác nhau.