Dầu mù u thu được theo phương pháp ép cơ học được chúng tôi đem thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định tại Phòng thử hoạt tính sinh học phòng 602 nhà A 18 Viện hóa học Việt Nam. Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định được thực hiện dựa trên phương pháp pha loãng nồng độ. Đây là phương pháp thử hoạt tính
kháng vi sinh vật kiểm định và nấm nhằm đánh giá mức độ kháng khuẩn mạnh yếu của các mẫu thử thông qua các giá trị thể hiện hoạt tính là MIC, IC50, MBC.
* Đối tượng thử: các chủng vi sinh vật và nấm gây bệnh.
- Vi khuẩn Gr (+): Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Lactobacillus fermentum.
- Vi khuẩn Gr (-): Salmonella enterica, Pseudomonasaeruginosa, Escherichia coli.
- Nấm: Candida albicans.
* Cách tiến hành
- Pha loãng mẫu thử: mẫu thử ban đầu được pha loãng trong DMSO và nước cất tiệt trùng thành một dãy 05 nồng độ theo yêu cầu và mụch đích thử. Nồng độ thử cao nhất đối với dịch chiết là 256g/ml và với chất sạch là 128g/ml.
- Thử hoạt tính: lấy 10l dung dịch mẫu thử ở các nồng độ vào đĩa 96 giếng, thêm 200l dung dịch vi khuẩn và nấm có nồng độ 5.105CFU/ml, ủ ở 370C/24h.
- Xử lí kết quả: Giá trị MIC được xác định tại giếng có nồng độ chất thử thấp nhất ức chế sự phát triển của vi sinh vật. Giá trị IC50 được tính toán dựa trên số liệu đo độ đục của môi trường nuôi cấy bằng máy quang phổ TECAN và phần mềm raw data. Giá trị MBC được xác định số khuẩn lạc trên đĩa thạch.
Để thực hiện các nội dung nghiên cứu của đề tài, chúng tôi tiến hành thực nghiệm theo sơ đồ như hình 2.2.