4.1.2.1. Cách lấy tinh dịch.
Thời gian kiêng xuất tinh trước xét nghiệm từ 3-5 ngày mà chúng tôi lấy mẫu làm nghiên cứu, được các tác giả thống nhất là khoảng thời gian hợp lý để cho một mẫu tinh dịch có kết quả xét nghiệm chính xác nhất.
Có nhiều phương pháp để lấy tinh dịch: tự lấy bằng tay (thủ dâm), giao hợp gián đoạn hoặc giao hợp bằng bao cao su chuyên dụng. Trong mỗi phương pháp có những ưu, nhược điểm riêng.
Phương pháp lấy tinh dịch bằng giao hợp gián đoạn thường chỉ dùng cho những trường hợp lấy tinh dịch bằng tay thất bại. Phương pháp này thường khó lấy đủ lượng tinh dịch xuất ra, và tinh dịch sau khi lấy không đảm bảo độ vô trùng. Theo nghiên cứu của tác giả Valli Dehghani và CS năm 2004, khi so sánh chất lượng tinh dịch bằng hai phương pháp là thủ dâm và giao hợp gián đoạn, kết quả là tinh trùng di động tiến tới của phương pháp thủ dâm là 58,76, ± 13,5%, còn của phương pháp giao hợp gián đoạn là 46,81 ± 15,7% (P< 0,001), về hình thái phương pháp thủ dâm là 63,36 ± 13,4%, còn phương pháp giao hợp gián đoạn là 54,03 ± 25%, (P< 0,001), về mật độ TT ở phương pháp thủ dâm cũng cao hơn (P< 0,05), tác giả đã kết luận chất lượng tinh dịch lấy bằng phương pháp thủ dâm cao hơn lấy tinh dịch bằng giao hợp gián đoạn [64].
Phương pháp giao hợp bằng bao cao su chuyên dụng, tinh dịch được dễ lấy nhưng không được phổ biến vì giá thành cao, phòng lấy tinh dịch phải rộng rãi. Nhưng lượng tinh dịch xuất ra khó được đo chính xác. Còn phương pháp sử dụng bao cao su thông thường không được áp dụng vì trong bao cao su thông thường có hoá chất tác động có hại đến tinh trùng.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi cho bệnh nhân lấy tinh dịch bằng tay, và phương pháp này vẫn đang được áp dụng ở nhiều trung tâm xét nghiệm và nghiên cứu. Ở phương pháp này trang thiết bị, dụng cụ, phòng phục vụ cho việc lấy mẫu khá đơn giản. Mẫu tinh dịch được lấy đầy đủ trong lọ đựng vô trùng. Tuy nhiên cũng có một vài trường hợp không thực hiện được phương pháp này để lấy mẫu.
Mẫu tinh dịch sau khi lấy được đựng trong lọ chuyên dụng và đặt vào trong tủ ấm có nhiệt độ 370 C, trong thời gian 30 phút, với nhiệt độ và thời gian này đủ để cho mẫu tinh dịch được ly giải hoàn toàn.
Nhiệt độ phòng làm xét nghiệm cũng rất quan trọng, nhiệt độ phòng thích hợp nhất là 18 – 240 C. Nhiệt độ phòng thấp quá hay cao quá cũng ảnh hưởng đến khả năng di động của tinh trùng.
Mẫu tinh dịch chúng tôi chọn để nghiên cứu là những mẫu có kết quả xét nghiệm tinh dịch đồ bình thường theo tiêu chuẩn chung của WHO 2010, được các chuyên gia xét nghiệm làm tại Labo của bộ môn Mô học và Phôi thai học của trường Đại học Y Hà Nội.
4.1.2.2. Cách lấy mẫu.
Sau khi mẫu đã hoá lỏng hoàn toàn, chúng tôi thực hiện đúng từng bước theo quy trình hướng dẫn của mỗi phương pháp, kết quả mật độ và độ di động của tinh trùng mà chúng tôi thu được ở buồng đếm Makler so với kết quả mà các chuyên gia đánh giá không có sự khác biệt với P >0,05 (Biểu đồ 4.1 và 4.2
Biểu đồ 4.1. Mật độ trung bình bằng buồng đếm Makler của chuyên gia
(Makler1) và mật độ TB của nhóm nghiên cứu (Makler 2).
0 10 20 30 40 50 60 70 80 Tinh trùng di động tiến tới (PR) Tinh trùng di động không tiến tới (NP)
Tinh trùng không di động (IM) 54.9 7.8 37.5 55.5 7.5 37 Tỷ lệ % Makler 1 Makler 2
Biểu đồ 4.2. Tỉ lệ di động của TT đƣợc đánh giá bởi các chuyên gia (Makler1), và tỉ lệ di động đƣợc đánh giá của nhóm nghiên cứu
(Makler2). 10 30 50 70 90 110 130 150 170 190 Makler 1 Makler 2 110.8 111.4
Trong kỹ thuật lấy mẫu để cho vào buồng đếm Makler, buồng đếm Neubauer và cuvet của máy phân tích TT tự động SQA-IIB, chúng tôi thấy rằng để có được kết quả chính xác, các bước tiến hành phải thực hiện đúng quy trình, trước khi nhỏ tinh dịch vào buồng đếm hay hút vào cuvet, mẫu phải được ly giải hoàn toàn, sau đó lắc thật đều, số lượng mẫu đưa vào phải đủ theo quy định là 10 µl, nếu lượng mẫu ít quá hoặc nhiều quá đều dẫn đến sự sai lệch đáng kể về kết quả.
Đối với buồng đếm Makler và máy SQA-IIB thì dùng mẫu không cần pha loãng, còn với buồng đếm Neubauer việc xác định mật độ trên tiêu bản để quyết định độ pha loãng cho phù hợp là một vấn đề rất quan trọng. Tác giả Kell và CS ( 2000), sau khi nghiên cứu đã thấy rằng mật độ ở các mẫu tinh dịch khác nhau, cùng với một lượng pha loãng, thì những mẫu có mật độ tinh trùng thấp sẽ kém chính xác hơn so với mẫu có mật độ tinh trùng cao[53].
Tất cả quy trình lấy mẫu để tiến hành phân tích, đòi hỏi người làm phải được đào tạo bài bản, đúng kỹ thuật thì khi đó kết quả phân tích của mẫu mới có độ tin cậy.