Trong nghiên cứu đã sử dụng các phương pháp chuẩn quốc gia và quốc tế như sau:
5.1. Kỹ thuật tiêu cơ cá và thu thập ấu trùng:
- Đo kích thước cá
- Mỗi cá đo chiều dài Lo và L: (Lo-L)
L: từ mõm cá đến chót đuôi
(không cần đo chiều ngang cá: chỉđo chiều dài và cân nặng) - Cân cá
- Tiến hành xét nghiệm cá:
• Tiêu cơ từng cá thể cá
• Băm nhỏ và xay nhỏ cá từng mẫu cho vào dung dịch tiêu cơ, thường để trong lọ 100ml chứa 50ml dung dịch tiêu cơ gồm: HCl 8 ml + 6 g pepsin + nước cất vừa đủ 1.000 ml
• Trộn kỹ và để tủấm 37oC trong 4 giờ.
• Cho thêm 50 ml nước và lắc lên.
• Lọc toàn bộ mẫu bằng lưới có kích thước lỗ 1 x 1 mm và rửa bằng nước muối sinh lý 0,85%.
• Lắng cặn khoảng 7-8 lần đến khi cặn trong.
• Quan sát ấu trùng dưới kính lúp khi soi cặn đựng trong đĩa petri và thu thập ấu trùng bằng pipet pastuer
• Thu ấu trùng cho lên lam kính đểđịnh loại bằng hình thái học
• Bảo quản ấu trùng trong nước muối sinh lý 0,85%
• Bảo quản lâu dài trong formalin 10% đểđịnh loại bằng hình thái học
• Bảo quản lâu dài trong cồn 70% đểđịnh loại bằng sinh học phân tử.
5.2. Kỹ thuật xét nghiệm tìm ấu trùng sán lá trong ốc:
- Mổốc lấy gan-tuỵđặt lên lam kính, đậy lamen và soi. - Nếu ốc nhỏ có thể ép cảốc dưới 2 lam kính.
- Với ốc mút (Melanoides...) dùng kìm nhỏ bẻđuôi ốc, ấn nắp cho nước lên lam kính, đậy lamen và soi.
- Cốđịnh cercaria đểđịnh loại hình thái, ta cho ít lòng trắng trứng.
5.3. Xét nghiệm rau tìm trứng/ấu trùng giun sán và đơn bào:
Rửa rau để thu thập trứng giun sán và bào nang đơn bào từ nước rửa.
- Rửa từng lá, từng cuộng rau, không bỏ sót.
- Mỗi mẫu rau rửa 3 - 4 lần.
- Nước rửa để lắng 6 - 10 giờ.
- Gạn lấy phần nước dưới cho vào ống ly tâm.
- Lấy cặn xét nghiệm. Lưu ý cho vào vài giọt lugol trong 50% glyxerin để phát hiện bào nang đơn bào.
5.4. Xét nghiệm bùn tìm trứng giun sán và đơn bào bằng kỹ thuật Romanenko :
Tiến hành:
- Cân 100 gam bùn, cho vào ống ly tâm to, nếu ống nhỏ cho vào nhiều ống.
- Cho KOH hoặc NaOH vào với tỷ lệ 1/3 hoặc 1/5 và để 30 phút, trong thời gian này khuấy đều 4 lần.
- Sau đó lại khuấy 5 phút và ly tâm 5 phút (500-1000 vòng/phút).
- Trút bỏ nước và cho NaNO3 bảo hoà vào cặn, khuấy đều và ly tâm 5 phút (1000 vòng/phút).
- Nhỏ NaNO3 đầy đến miệng và đậy phiến kính lên, để 20 phút. - Nhấc lam kính lên, nhỏ 1 giọt glyxerin 50%, đậy lá kính và soi.
5.5. Kỹ thuật xét nghiệm nước tìm trứng giun sán và đơn bào:
Các mẫu nước xét nghiệm được xử lý như sau:
- Lấy mẫu nước đánh phèn, để lắng 1 giờ.
- Gạn bỏ nước phía trên.
- Lấy cặn cho vào cốc thót đáy có chân, để lắng 2-4 giờ.
- Dùng ống hút bỏ nước trong phía trên.
- Hút cặn soi tìm trứng ký sinh trùng.
- Chú ý soi hết toàn bộ cặn.