Nhiệt độ trích ly làm tăng vận tốc và hiệu quả của quá trình trích ly do làm tăng hệ số khuếch tán chất chiết và giảm độ nhớt dung môi, từ đó tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình trích ly. Tuy nhiên, nếu nhiệt độ quá cao sẽ gây ra những bất lợi như: phá hủy các glycoside, thúc đẩy sự oxy hóa và epimer hóa các polyphenol, tăng chiết các chất khác gây khó khăn cho việc tinh chế. Nhiệt độ quá thấp thường làm giảm hiệu quả của quá trình trích ly. Vì vậy, trong nghiên cứu tách chiết cần xác định được nhiệt độ thích hợp cho quá
CGA M: Marker 1. pH= 5,0 2. pH= 5,5 3. pH= 6,0 4. pH= 6,5 5. pH= 7,0 6. pH= 7,5
trình tách chiết sao cho không quá cao để tránh sự oxy hóa dịch chiết nhưng cũng không quá thấp gây giảm hiệu quả quá trình chiết.
Nhiệt độ là yếu tố cốt yếu ảnh hưởng tới quá trình thuỷ phân. Hầu hết mọi quá trình thuỷ phân với mọi cơ chất đều phải có sự gia nhiệt kể cả không sử dụng enzyme. Nhiệt độ tác động tới bề mặt và cấu tạo cơ chất, giúp dung môi hoạt động tốt và dễ dàng phân cắt cơ chất hơn. Do vậy, thí nghiệm xác định nhiệt độ thích hợp cho quá trình thu nhận CGA từ quả cà phê xanh được thực hiện với nhiệt độ 20oC, 30oC, 40oC, 50oC, 60oC. Kết quả thí nghiệm được thể hiện tại đồ thị 3.9.
Hình 3.9. Đồ thị mốiquan hệ của nhiệt độ và hàm lượng
chiết xuất CGA
Kết quả cho thấy hàm lượng CGA ít thay đổi. Khi nhiệt độ thay đổi từ 20oC – 60oC, hàm lượng CGA thu được từ 32,49 – 53,82 mg/g. Đạt cao nhất tại nhiệt độ 50oC (53,82 mg/g). Hàm lượng CGA thu được thấp nhất tại nhiệt độ 20oC (32,49 mg/g) do nhiệt độ thấp làm enzyme hoạt động không hiệu quả nên hiệu suất quá trình thuỷ phân thấp.
Nghiên cứu của Agnan M. Combo và Mario Aguedo (2012) cho thấy pectinase từ Aspergillus niger có phổ hoạt động tối ưu từ 40 – 60oC. Theo kết quả ở thí nghiệm trên, mức nhiệt đem lại hiệu quả cao nhất cho quá trình chiết xuất CGA là 50oC vẫn nằm trong khoảng nhiệt độ hoạt động tối ưu của pectinase.
Hình 3.10. Sắc ký đồ CGA trong thí nghiệm ảnh hưởng của nhiệt độ tới quá trình chiết CGA
Các đường chạy của các mẫu thí nghiệm đều xuất hiện vạch tương ứng vị trí của CGA chuẩn cho thấy sản phẩm dịch thuỷ phân đã tách được CGA từ quả cà phê xanh. Dựa vào kết quả tại đồ thị hình 3.9 và sắc ký đồ hình 3.10, chọn điều kiện nhiệt độ 50oC để tiếp tục nghiên cứu.