Các phương pháp huyết thanh học dùng trong xét nghiệm chẩn đốn nhiễm HIV hiện nay chỉ cĩ thể áp dụng sau 18 tháng tuổi, do trong quá trình mang thai, kháng thể kháng HIV từ mẹ được truyền sang thai nhi, kháng thể này sẽ tồn tại trong cơ thể trẻ khoảng 12-18 tháng. Các xét nghiệm huyết thanh học khơng phân biệt giữa kháng thể HIV do mẹ truyền sang và kháng thể kháng HIV do cơ thể trẻ nhiễm HIV sản xuất ra. Do đĩ, tất cả các trẻ được sinh ra từ mẹ nhiễm HIV sẽ cĩ kết quả xét nghiệm kháng thể dương tính cho đến khi kháng thể của mẹ truyền sang khơng cịn nữa. Tới tháng thứ 12, 94.5% trẻ sẽ khơng cịn kháng thể do mẹ truyền cho và tới 18 tháng tuổi, gần 100% sẽ khơng cịn kháng thể của mẹ và những trẻ khơng nhiễm HIV sẽ cĩ xét nghiệm HIV âm tính vào thời điểm này. Vì vậy, các xét nghiệm huyết thanh học tìm kháng thể kháng HIV chỉ cĩ thể tin cậy ở trẻ trên 18 tháng tuổi. Vì thế, các xét nghiệm chẩn đốn sớm nhiễm HIV cho trẻ em dưới 18 tháng tuổi phải dựa vào các xét nghiệm virút học.
Các phương pháp chẩn đốn sớm nhiễm HIV nhằm phát hiện virút trong máu người bệnh bao gồm:
· Phương pháp nuơi cấy phân lập virút, đây là phương pháp cổ điển, nhưng mất nhiều thời gian, giá thành cao và hiện nay ít được sử dụng.
· Phương pháp PCR - DNA định tính xác định trẻ nhiễm HIV khi cĩ kết quả dương tính với ít nhất 2 trên 3 gen của virút được thực hiện trên hai mẫu máu được lấy ở hai thời điểm khác nhau.
· Phương pháp PCR phát hiện RNA virút cũng là một phương pháp chính xác và đáng tin cậy.
· Cả hai phương pháp phát hiện DNA hay RNA ngày càng được cải tiến nhằm giảm giá thành, tự động hĩa và cho kết quả nhanh hơn. Nhiều sinh phẩm thương mại đã được đưa vào sử dụng, tuy nhiên độ đặc hiệu, độ nhạy và ngưỡng phát hiện của các sinh phẩm rất khác nhau và cĩ thể bị ảnh hưởng của các thứ type di truyền của virút.
· Xét nghiệm cực nhạy (Ultrasensitive) phát hiện kháng thể p24 cũng là một phương pháp được dùng trong chẩn đốn sớm cho trẻ trên 6 tuần tuổi nhưng cịn hạn chế về độ nhạy và khơng sử dụng được với các mẫu máu lấy trên DBS.
· Phương pháp Real - time PCR để phát hiện RNA hoặc DNA provirút là một phương pháp hiện nay hay được sử dụng tuy nhiên giá thành vẫn cao
Bên cạnh đĩ, các xét nghiệm dùng trong chẩn đốn sớm được thực hiện trên các mẫu huyết tương chiết từ máu tồn phần cĩ chất chống đơng EDTA. Quá trình vận chuyển địi hỏi những điều kiện nghiêm ngặt về nhiệt độ, về phương pháp cũng như thời gian vận chuyển. Với các kỹ thuật phát hiện RNA virút trong huyết tương, thời gian từ khi lấy máu đến khi thực hiện xét nghiệm yêu cầu khơng quá 6 giờ. Do đĩ, đối với các tỉnh ở xa, chi phí vận chuyển cho mẫu máu tồn phần tốn kém, nhân viên vận chuyển mẫu phải được tập huấn về cách bảo quản và những nguyên tắc an tồn sinh học trong quá trình vận chuyển. Để khắc phục khĩ khăn này, khuyến cáo quốc tế hiện nay là sử dụng mẫu máu khơ nhỏ trên giấy thấm (mẫu DBS-Dried Blood Sample). Máu được lấy từ gĩt chân của trẻ hay từ máu tồn phần, nhỏ vào giấy lọc và gửi mẫu tới phịng xét nghiệm qua đường bưu điện ở nhiệt độ phịng.
Ngồi ra cĩ thể tập huấn cho các nhân viên y tế về việc lấy mẫu và vận chuyển mẫu dễ dàng.
Vì vậy, việc sử dụng phương pháp lấy và vận chuyển mẫu DBS cho phép trẻ sơ sinh tại các vùng xa phịng xét nghiệm vẫn cĩ điều kiện tiếp cận chương trình chẩn đốn sớm HIV.
Trong điều kiện của nước ta hiện nay, theo khuyến cáo của Bộ Y tế, xét nghiệm nhiễm HIV cho trẻ dưới 18 tháng tuổi được thực hiện bằng kỹ thuật PCR để phát hiện DNA hoặc RNA virút và được thực hiện khi trẻ đủ 4 tuần tuổi trở lên.
Quy trình xét nghiệm phát hiện nhiễm HIV cho trẻ dưới 18 tháng tuổi được thực hiện theo hướng dẫn của Bộ Y tế như sau:
Sơ đồ I.4. Quy trình xét nghiệm phát hiện nhiễm HIV cho trẻdưới 18 tháng tuổi
(1)Làm xét nghiệm PCR cho trẻ từ4 đến 6 tuần tuổi, hoặc ngay sau đĩ càng sớm càng tốt. (2)Nếu trẻđủ tiêu chuẩn lâm sàng bệnh HIV nặng điều trị ngay bằng ARV, đồng thời xét nghiệm PCR.
(3)Nếu trẻ cĩ bú sữa mẹ, trẻ vẫn cĩ nguy cơ phơi nhiễm HIV, làm lại xét nghiệm 6 tuần
sau khi ngưng bú.
(4)Tư vấn chăm sĩc điều trị HIV/AIDS, điều trị theo Hướng dẫn chẩn đốn điều trị
HIV/AIDS.
(5)Phịng xét nghiệm làm lại xét nghiệm PCR trên các mẫu cịn lưu để khẳng định kết quả. Kết quả cuối cùng khẳng định dương tính, tiếp tục điều trị ARV. Kết quả cuối cùng khẳng
định âm tính, dừng điều trị ARV. (6)Tiếp tục điều trịARV theo quy định.
(7)Nếu trẻ hồn tồn khơng bú sữa mẹ trong vịng 6 tuần trước khi làm xét nghiệm, trẻ
khơng nhiễm HIV. Nếu trẻ cĩ bú sữa mẹ, thực hiện lại xét nghiệm phát hiện kháng thể
kháng HIV sau khi trẻ ngừng bú sữa mẹ đủ 6 tuần; nếu kết quả xét nghiệm kháng thể kháng HIV dương tính, thực hiện xét nghiệm PCR; nếu kết quả xét nghiệm kháng thể
kháng HIV âm tính, trẻ khơng bị nhiễm HIV tại thời điểm xét nghiệm.
(8)Nên làm lại xét nghiệm phát hiện kháng thể kháng HIV khi trẻđủ 18 tháng tuổi (9)Nếu mẹ cĩ xét nghiệm HIV dương tính, xửtrí như trẻphơi nhiễm
Đối với trẻphơi nhiễm HIV dưới 9 tháng tuổi
Bộ Y tế Việt Nam quy định cần làm xét nghiệm PCR chẩn đốn nhiễm HIV cho trẻ phơi nhiễm HIV từ 4 đến 6 tuần tuổi hoặc ngay sau đĩ càng sớm càng tốt.
· Nếu xét nghiệm PCR dương tính, lấy máu lần 2 để khẳng định, nếu kết quả dương tính thì khẳng định trẻ nhiễm HIV và điều trị ARV cho trẻ.
· Nếu xét nghiệm PCR âm tính, phịng xét nghiệm làm lại xét nghiệm PCR trên các mẫu cịn lưu để khẳng định kết quả. Kết quả cuối cùng khẳng định dương tính, tiếp tục điều trị ARV. Kết quả cuối cùng khẳng định âm tính, dừng điều trị ARV.
Đối với trẻphơi nhiễm HIV từ9 đến 18 tháng tuổi
Xét nghiệm phát hiện kháng thể kháng HIV
· Nếu kết quả dương tính, tiếp tục làm xét nghiệm PCR và nếu trẻ đủ tiêu chuẩn lâm sàng bệnh HIV nặng điều trị ngay bằng ARV.
· Nếu kết quả âm tính, trẻ hồn tồn khơng bú sữa mẹ trong vịng 6 tuần trước khi làm xét nghiệm thì trẻ khơng nhiễm HIV. Nếu trẻ cĩ bú sữa mẹ, thực hiện
lại xét nghiệm phát hiện kháng thể kháng HIV sau khi trẻ ngừng bú sữa mẹ đủ 6 tuần. Nếu kết quả xét nghiệm kháng thể kháng HIV dương tính, thực hiện xét nghiệm PCR. Nếu kết quả xét nghiệm kháng thể kháng HIV âm tính, trẻ khơng bị nhiễm HIV tại thời điểm xét nghiệm.
Đối với trẻ nghi ngờ nhiễm HIV dưới 18 tháng tuổi
Xét nghiệm phát hiện kháng thể kháng HIV
· Nếu kết quả dương tính, tiếp tục làm xét nghiệm PCR và nếu trẻ đủ tiêu chuẩn lâm sàng bệnh HIV nặng điều trị ngay bằng ARV.
· Nếu kết quả âm tính, trẻ khơng nhiễm HIV trong thời điểm xét nghiệm.
I.6.3. Các xét nghiệm chẩn đốn sớm nhiễm HIV cho trẻ dưới 18 tháng tuổi thực hiện tại viện Pasteur TP. HCM