3. Ý nghĩa của luận văn
3.5. Vai trò của CRE với khả năng biểu hiện của gen RMP1 ở hạt phấn
Để đánh giá vài trò của CRE đối với hoạt động của promoter RMP1 và RMP1del::GFP/GUS vào cây Arabidopsis thaliana thông qua vi khuẩn
A.tumefaciens. Kết quả thu được 15 cây chuyển gene RMP1 và 20 cây
RMP1del thế hệ T1 sống sót trên môi trường chọn lọc kanamycin. Những cây chuyển gen này được chuyển ra trồng trong chậu đất để tiến hành đánh giá. Để khẳng định sự có mặt của gen chỉ thị GUS trong các cây chuyển gen này tiến hành phân tích ngẫu nhiên 10 cây chuyển gene bằng PCR với cặp mồi GUS-F và GUS-R. Kết quả điện di sản phẩm PCR trên gel agarose 1% cho thấy tất cả các cây chuyển gen cấu trúc RMP1 ::GFP/GUS đều cho kết quả dương tính. Trong khi đó chúng tôi thu được 9/10 cây cho kết quả dương tính ở các cây chuyển gen RMP1del (Hình 3.7).
35
Hình 3.7. Kết quả phân tích cây chuyển gen bằng PCR với cặp mồi GUS-F/GUS-R
Ghi chú : M : marker 1kb ; (+) đối chứng dương tính ; (-) đối chứng âm tính ; từ #1 đến #10 : cây chuyển gene mang cấu trúc vector
RMP1 ::BGFP/GUS (A) và vector RMP1del ::GFP/GUS (B).
Phân tích biểu hiện gen GUS ở cụm hoa cho thấy mức độ biểu hiện khác nhau ở các cây chuyển gen RMP1 và RMP1del. Gen GUS biểu hiện mạnh ở hạt phấn khi được điều khiển bởi promoter RMP1 (Hình 3.8C). Ở các cây chuyển gen RMP1edel mức độ biểu hiện của gen GUS yếu hơn (Hình 3.8C). Đồng thời cây đối chứng không chuyển gen thì hạt phấn không biểu hiện màu xanh đặc trưng do không có gen chỉ thị GUS. Mặt khác ở các bộ phận khác như lá, thân của cây được chuyển gen cũng không biểu hiện màu xanh của gen chỉ thị GUS như ở hạt phấn. Kết quả phân tích biểu hiện gen GUS ở cụm hoa của các cây chuyển gen hoàn toàn phù hợp với kết quả phân tích biểu hiện gen RMP1 dựa trên cơ sở dữ liệu heat-map
Hình 3.8. Biểu hiện của gen GUS ở cụm hoa cây chuyển gen Ghi chú : Màu xanh (mũi tên) là biểu hiện của gen GUS
Từ kết quả phân tích biểu hiện gen GUS ở các cây Arabidopsis chuyển gen được điều khiển bởi promoter RMP1del cho thấy khả năng biểu hiện gen giảm đi đáng kể so với promoter RMP1 nguyên vẹn. Điều này cho thấy việc mất đi 780bp từ vị trí -632 đến -1403 tính từ điểm khởi đầu mã hóa (ATG) đã ảnh hưởng đến khả năng kiểm soát biểu hiện gen GUS. Khi loại bỏ vùng promoter nói trên, ngoài một số CRE phổ biến như : ARR1AT, CAATBOX1, CACTFTPPCA1, DOFCOREZM, EBOXBNNAPA, GATABOX,… còn có các CRE đặc hiệu như GTGANTG10 bị mất đi (hình 3.8B) đã làm giảm tín hiệu biểu hiện của gen GUS ở hạt phấn ở cây chuyển gen RMP1del ::GUS (hình 3.8C).
37
CHƯƠNG 4
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1. Kết luận
Từ các kết quả nghiên cứu trên chúng tôi kết luận :
- Đã sàng lọc được CRE từ 10 gen RMP có biểu hiện chuyên biệt ở hạt phấn
lúa.
- Tách dòng và thiết kế thành công vector chuyển gen mang promoter RMP1del có kích thước 623 bp, ký hiệu là pKG7-RMP1::GFP/GUS và pKG7- RMP1del ::GFP/GUS.
- Chuyển thành công vector chuyển gen vào cây Arabidopsis để đánh giá hoạt động của promoter. Phân tích 9/10 cây chuyển gen RMP1del ::GFP/GUS bằng PCR cho kết quả dương tính với gen GUS.
- Promoter RMP1del mất 780 bp đã làm giảm mức độ biểu hiện của gen do mất một số CRE, trong đó có yếu tố tăng cường khả năng biểu hiện gen ở hạt phấn GTGANTG10.
4.2. Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu đánh giá toàn diện về khả năng hoạt động của promoter RMP1del ở cây lúa và vai trò của các CRE đối với khả năng biểu hiện gen.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
I. Tài liệu tiếng việt
1. Chu Đức Hà, Lê Tiến Dũng (2015), “Vai trò của yếu tố điều hòa Cis trong đáp ứng của thực vật với các điều kiện bất lợi” , Báo tạp chí sinh học, 37(3), tr. 370-383.
2. Lê Thị Thu Hiền, Trần Thị Phương Liên, Nông Văn Hải (2007), “Promoter và ứng dụng trong công nghệ gen thực vật”, Tạp chí công nghệ sinh học, 5(1), tr.118.
3. Nguyễn Thị Thúy Quỳnh, Nguyễn Huy Hoàng , Hao Jen Hoang (2016) “Nghiên cứu hoạt động của promoter LRR-RLK VIII điều khiển tính chống chịu arsenic trong cây mô hình Arabidopsis”, tạp chí Công nghệ Sinh học 14(3), tr. 499-505.
AI. Tài liệu tiếng anh
4. Aida M., Ishida T., Fukaki H., Fujisawa H., Tasaka M. (1997), “Genes involved in organ separation in Arabidopsis: an analysis of the cup-shaped cotyledon mutant, Plant Cell, 9, pp. 841 - 857.
5. Bae HK, Kang HG, Kim GJ, Eu HJ, Oh SA, Song JT, Chung IK, Eun MY,
Park SK (2010), “Transgeneic rice plants carrying RNA interference constructs of AOS (allene oxide synthase) genes show severe male sterility”,
Plant Breed , 129, pp. 647 – 651.
6. Benfey P. N., Chua N. H. (1990), “The cauliflower mosaic virus 35S promoter: combinatorial regulation of transcription in plants”, Science, 250(4983), pp. 959966.
7. Bevan M., Walsh S (2005), “The Arabidopsis Genome: a foundation for plant research”, Genome Reseearch, 15(12), pp. 1632 -1642.
39
8. Brink RA, MacGillivray JH (1924) Segregation for the waxy character in maize pollen and differential development of the male gametophyte. Am J Bot 11:465–469
9. Chang F., Gu Y., Ma H., Yang Z. (2013), “AtPRK2 promotes ROP1 activation via RopGEFs in the control of polarized pollen tube growth”,
Mol Plant, 6, pp. 1187-1201.
10. Christensen A.H. & Quail P.H. (1996), “Ubiquitin promoter-based vectors for high-level expression of selectable and/or screenable marker genes in monocotyledonous plants”, Transgenic Research, 5, pp. 213 - 218.
11. Clough (1998), “Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-
mediated transformation of Arabidopsis thaliana ”, lant J., 16(6), pp. 735 -
743.
12. Elmayan T, Tepfer M (1995) Evaluation in tobacco of the organ specificity and strength of the rolD promoter, domain A of the 35S promoter and the 35S2 promoter. Transgenic Res 4:388-96
13. Endo M, Tsuchiya T, Saito H, Matsubara H, Hakozaki H, Masuko H, Kamada M, Higashitani A, Takahashi H, Fukuda H, Demura T, Watanabe M (2004) Identification and molecular characterization of novel anther- specific genes in Oryza sativa L. by using cDNA microarray. Genes Genet Syst 79:213-226
14. Ezcurra I, Ellerström M, Wycliffe P, Stålberg K, Rask L (1999) Interaction between composite elements in the napA promoter: both the B-box ABA- responsive complex and the RY/G complex are necessary for seed-specific expression. Plant Mol Biol 40:699-709
15. Fehlberg V, Vieweg MF, Dohmann EM, Hohnjec N, Pühler A, Perlick AM, Küster H (2005) The promoter of the leghaemoglobin gene VfLb29: functional analysis and identification of modules necessary for its activation
in the infected cells of root nodules and in the arbuscule-containing cells of mycorrhizal roots. J Exp Bot 56:799-806
16. Filichkin SA, Leonard JM, Monteros A, Liu PP, Nonogaki H (2004) A novel endo-beta-mannanase gene in tomato LeMAN5 is associated with anther and pollen development. Plant Physiol 134:1080-1087
17. Gelvin S. B. (2003), “Agrobacterium - mediated plant transformation t he biology behind the “Gene - jockeying” Tool”, Microbiology and Molecular
Biology Reviews, 67 (1), pp. 16 - 37.
18. Gowik U, Burscheidt J, Akyildiz M, Schlue U, Koczor M, Streubel
M, Westhoff P (2004) cis-Regulatory elements for mesophyll-specific gene expression in the C4 plant Flaveria trinervia, the promoter of the C4
phosphoenolpyruvate carboxylase gene. Plant Cell 16:1077-1090
19. Grover A., Twell D. & Schleiff E. (2016). Pollen as a target of environmental changes, Plant Reprod, 29, https://doi.org/10.1007/s00497-016-0285-7.
20. Hartmann U, Sagasser M, Mehrtens F, Stracke R, Weisshaar B (2005) Differential combinatorial interactions of cis-acting elements recognized by R2R3-MYB, BZIP, and BHLH factors control light-responsive and tissue- specific activation of phenylpropanoid biosynthesis genes. Plant Mol Biol
57:155-171
21. Honys D, Oh SA, Renak D, Donders M, Solcova B, Johnson JA, Boudova R, and Twell D (2006) Identification of microspore-active promoters that allow targeted manipulation of gene expression at early stages of microgametogenesis in Arabidospsis. BMC Plant Biol 6: 31
22. Kim DW, Lee SH, Choi SB, Won SK, Heo YK, Cho M, Park YI, Cho HT (2006) Functional conservation of a root hair cell-specific cis-element in angiosperms with different root hair distribution patterns. Plant Cel 18:2958-2970
41
23. Lu XC, Gong HQ, Huang ML, Bai SL, He YB, Mao X, Geng Z, Li SG, Wei L, Yuwen JS, Xu ZH, Bai SN (2006) Molecular analysis of early rice stamen development using organ-specific gene expression profiling. Plant Mol Biol 61:845-861
24. Noad R. J., D. S. Turner and S. N. Covey (1997), “ Expression of functional elements inserted into the 35S promoter region of infectious cauliflower mosaic virus replicons”, Nucleic acids research, 25(6), pp. 1123 – 1129.
25. Noir S., Brautigam A., Colby T., Schmidt J., Panstruga R. (2005), “A reference map of the Arabidospsis thaliana mature pollen proteome”,
Biochem Biophys Res Commun, 337, pp. 1257-1266
26. Oh SA, Johnson A, Smertenko A, Rahman D, Park SK, Hussey PJ, Twell D (2005) A divergent cellular role for the FUSED kinase family in the plant- specific cytokinetic phragmoplast. Curr Biol 15:2107–2111
27. Oo MM, Bae HK, Nguyen TD, Moon M, Oh SA, Kim JH, Soh MS, Song JT, Jung KH, Park SK (2014) Evaluation of rice promoters conferring pollen-specific expression in a heterologous system, Arabidospsis. Plant Reprod 27:47-58
28. Parnell FR (1921) Note on the detection of segregation by examination of the pollen of rice. Genet 11:209–212
29. Paupiere M. J., van Heusden A. W., Bovy A. G. (2014), “The metabolic basis of pollen thermo-tolerance: perspectives for breeding”, Metabolites, 4, pp. 889-920.
30. Plesch G, Ehrhardt T, Mueller-Roeber B (2001) Involvement of TAAAG elements suggests a role for Dof transcription factors in guard cell-specific gene expression. Plant J 28:455-64
31. Reyes JC, Muro-Pastor MI, Florencio FJ (2004) The GATA family of transcription factors in Arabidospsis and rice. Plant Physiol 134:1718-1732
32. Rogers HJ, Bate N, Combe J, Sullivan J, Sweetman J, Swan C, Lonsdale DM, Twell D (2001) Functional analysis of cis-regulatory elements within the promoter of the tobacco late pollen gene g10. Plant Mol Biol 45(5):577- 585
33. Ross EJ, Stone JM, Elowsky CG, Arredondo-Peter R, Klucas RV, Sarath G (2004) Activation of the Oryza sativa non-symbiotic haemoglobin-2 promoter by the cytokinin-regulated transcription factor, ARR1. J Exp Bot 55:1721-1731
34. Rutley N, Twell D (2015) A decade of pollen transcriptomics. Plant Reprod 28: 73-89
35. Safadi F., Reddy V. S., Reddy A. S. (2000), “A pollen-specific novel calmodulinbinding protein with tetratricopeptide repeats”, J Biol Chem, 275, pp 35457-35470.
36. Scott RJ, Spielman M, Dickinson HG (2004) Stamen structure and function. Plant Cell 16:S46–S60
37. Sharma N, Russell SD, Bhalla PL, Singh MB (2011) Putative cis-regulatory elements in genes highly expressed in rice sperm cells. BMC Res Notes 4:319
38. Shirsat A, Wilford N, Croy R, Boulter D (1989) Sequences responsible for the tissue specific promoter activity of a pea legumin gene in tobacco. Mol Gen Genet 215:326-331
39. Simpson SD, Nakashima K, Narusaka Y, Seki M, Shinozaki K, Shinozaki KY (2003) Two different novel cis-acting elements of erd1, a clpA homologous Arabidospsis gene function in induction by dehydration stress and dark-induced senescence. Plant J 33: 259–270
40. Solano R, Nieto C, Avila J, Cañas L, Diaz I, Paz-Ares J (1995) Dual DNA binding specificity of a petal epidermis-specific MYB transcription factor (MYB.Ph3) from Petunia hybrida. EMBO J 14:1773-1784
43
41. Stålberg K, Ellerstöm M, Ezcurra I, Ablov S, Rask L (1996) Disruption of an overlapping E-box/ABRE motif abolished high transcription of the napA storage-protein promoter in transgenic Brassica napus seeds. Planta 199:515–519
42. Swapna L, Khurana R, Vijaya-Kumar S, Tyagi AK, Rao KV (2011) Pollen- specific expression of Oryza sativa indica pollen allergen gene (OSIPA) promoter in rice and Arabidospsis transgenic systems. Mol Biotechnol 48:49-59
43. Tan C. M., Chen R. J , Zhang J. H., Gao X. L., Li L. H., Wang P. R., Deng X. J., Xu Z. J. (2013), “ OsPOP5, a prolyl oligopeptidase family gene from rice confers abiotic stress tolerance in Escherichia coli”, Int J Mol Sci , 14, pp. 20204-20219.
44. Turner D. S., D. G. McCallum and S. N. Covey (1996), “ Roles of the 35S promoter and multiple overtapping domains in the pathogenicity of the pararetrovirus cauliflower mosaic virus”, Journal of virology, 70(8), 4514.
45. Twell D, Yamaguchi J, Wing RA, Ushiba J, McCormick S (1991) Promoter analysis of genes that are coordinately expressed during pollen development reveals pollen-specific enhancer sequences and shared regulatory elements. Genes Dev 5:496-507
46. Wei L Q, Xu WY, Deng ZY, Su Z, Xue Y, Wang T (2010) Genome scale analysis and comparison of gene expression profiles in developing and germinated pollen in Oryza sativa L. BMC Genomics 11:338
47. Welchen E, Gonzalez DH (2005) Differential expression of the
Arabidospsis cytochrome c genes Cytc-1 and Cytc-2. Evidence for the
involvement of TCP-domain protein-binding elements in anther- and meristem-specific expression of the Cytc-1 gene. Plant Physiol 139:88-100
48. Wu C, Washida H, Onodera Y, Harada K, Takaiwa F (2000) Quantitative nature of the Prolamin-box, ACGT and AACA motifs in a rice glutelin gene
promoter: minimal cis-element requirements for endosperm-specific gene expression. Plant J 23:415-421
49. Yanagisawa S (2000) Dof1 and Dof2 transcription factors are associated with expression of multiple genes involved in carbon metabolism in maize. Plant J 21:281-288
50. Yue YZ, Sun J, Huang X, Peng H, Liu GF and Hu HR (2014) Characterization of a novel anther-specific gene encoding a leucine-rich repeat protein in petunia. Gen Mol Res 13:9889-9898
51. Zhang D, Xue L, Lu Z (2011) Cytological analysis and genetic control of rice anther development. Genet Genomics 38:379-390
45
Phụ lục 1
Trình tự gen RMP và vị trí các CRE
Vùng promoter nằm trước mã bộ ba khởi đầu (ATG), trình tự intron được ký hiệu chữ thường, trình tự exon ký hiệu bởi các chữ cái in hoa. Vị trí của một số CRE chính được đánh dấu trên vùng promoter tương ứng như sau:
DOFCOREZM AAAG
POLLEN1LELAT52 AGAAA
GTGANTG10 GTGA
SITEIIATCYTC TGGGCY (Y=C/T)
ARR1AT NGATT (N=A/C/T/G )
IBOXCORE GATAA WRKY71OS TGAC MYCCONSENSUSAT CANNTG RMP1 (Os01g0533400). ORIGIN -1403 gaacaaaaaaacaatgagaatgacgaccaggattttctataacaatgaatttcattttca
-1343 gagcgcagttgcttgctgcaaataatactcttttttatctaattgtatcaccttatctaa
-1283 ttttatcacctttggatgtaattatctgagatgatcaacaaagctttaattcctttatct -1223 aaattattgtggaggaatcattggtaaaggaatcaagtcattcattgaagacacacatgc -1163 tggaatcaagatttcaccacaggataacaattttcttggtttgcatgatagactcgttac -1103 tgtcacaggacccttggaccatcagatgcgtgcaatatatttgatatgaagcataagtta -1043 tcggaggacgttcactacccacctaatctgagttccccatttccatatgcaggccttagt -983 ttccctagttaccctggtgttcctgttgggtattatgatcccacaggtgccgtataataa -923 tgctgtgaattatggacctaatgggtatggaggaagggaccaaaacaacaaacccagtac -863 acctatgagatctcacctgctaacaatgacgcccaagattctcactattggtattgctga -803 tgaacattttggtgctgtcgtacgacgtgccggaaggaacattacagagatcattcaggc -743 tagtggtgccaggatcaagatatctgatagggataactggaacatcagaagctattcagg -683 cagcagagtctatgataatgcacagggtgtcagccagttccgagaggtgataaaatctcg -623 tgaagagacgaggggcattatcatctgatggaaaagaattctgatgccaagttaggagga -563 aaaatttgataatttaacgcttttttcattgtccaattactttaattgatatttttgtga -503 ggatgatatgtgagaccatatgagtgtatgaaagtgaaccagaatgtcaaataatcgaaa -443 cccattgaaaatagtgttaaattatcaaatctctcagttaggaggaggggatggagattg -383 tcttttctagttttagcactatccgcaaaaaaaaaagaaacggcacgcaatctcgatttt -323 acggctaaccactaattatcgtatcatacgtctttatcgtatgcatggcgatccggctta -263 actactttgtttgtttctctgtgcaatagtatctccaagattaacaaacccatgcccacg -203 tgtactacgtaattatcctctattgtatctatctccaacgtacggcgcatcgtatcgctg -143 cggccTATAAATtccgtatcacccccacgcccgatctctgcaattcgatcgcttgcatct -83 gcaaagttgcaactcatctcgtctcctcctctcctcccctcctcccctgtagcctagcta -23
attaacttcaaattagcagcagtATGATGGGACGGCGCGGCAGCAGCTGGTGCCGGTGGT +38 GGGTGGCGCTGCTGGTCCTCGCCGTGGCGGCCGATGCCGTGGGCTGCACCAGCGTCAGCT +98 ACGACGACCGCAGCCTCGTCATCGACGGCCAGCGCCGGATCATCCTCTCTGGTTCCATCC
+158 ATTATCCCCGGAGCACTCCCGAGgtaaccgacttgttatactagccgtcaacccgtgcaa +218 cgcacgagataattttaaatattattttttagccctataaaattttactctgatagtatt +278 tcagtcatacaaaatcgtataggaatggtttaaattgatggcaaattaatgccaactgca +338 atatggtgatttttaatttattttctgagtgaattatattttaatcatagaattcgttgt +398 atatttttaaaattgtaagatccatgtattatgaatggtgtacaatattgatattgttat +458 caccgttgagaattatattgaaattgtaactatgcgtagtaatgtgttaagtggaaaact +518 aattaattaaataaattttggcattagatccaatctgtacatgtaaaaagaaataaaaaa +578 agtagccacggaattaatcatatgttggtagcaacataatcattgtccaaaattctgtcc +638 gtgtagtcaacataatcatagactaaactctgtcagcaaagtaattagcacgttactatg +698 tactcttccaggtgctcatttttcaaccgtgtcatatatatagtttacccaggttaaaat +758 tgtttgagatgagaaaccaatctagattgagaaacaataatacccgatcgacttggagat +818 atctgagcgcgtcctaaagttcatctctatttccatttgtgttgatgcctccgcttgaaa +878 tccagatcatcggcaatatatccaactgaattcccaacaaaattgtatgtagagattatt +938 ggatgggatttgtgaggcccatgggaccatgatattaactataaattaataatgtgtggg +998 tctatttgatcaacggcagattcaccaggttaacgctgtataggtatagatattcctagt +1058 gtatactatttttgtttttcaatacatgatgtcgttaattttttaatatgtttgaacatt +1118 tgtaataatttatggagatacataagatataaatcatgcttaaaatactttgagtgataa +1178 aacaactcacaaaaaataaattataattatgtttttttaataagaagaatggttaaatgt +1238 gtgaaaaaatcaacaacatcatgtattaaaaaatagagatagttgataatattaatctgc +1298 aaattaaatgcatatacaactttgagtgttttgtactagtaggatacagagttgcttgct +1358 tgagtgtttcttttctttttgtgccatagatcgtgatgagctaagcagtgcgaggagttt +1418 tatgttctatacttttatatacttatgcatgcatattatgttgtgacttatattcgttcg +1478 atctttattttcttaatttgtgttaagaaattaatgaacataagcaatatatgtacgtgc +1538 gcaaaagattaatttgattttttttctatctaatctaatcttattgttgctatgcagaTG +1598 TGGCCGGATCTGATCAAGAAGGCGAAGGAAGGTGGTCTCGATGCCATCGAGACTTACATC +1658 TTTTGGAACGGCCATGAGCCGCACCGCCGCCAGgttcaatattactacttttgctttagc +1718 acataaacactactacgtactgcagctattacatacaataacaaccatggataaatacta +1778 gtaatactataacaatgtttttgctttgatcggcagtACAATTTTGAGGGTAACTACGAT +1838 GTCGTCAGGTTCTTCAAGGAGATCCAGAATGCCGGCATGTACGCCATTCTTCGCATTGGC +1898 CCGTACATCTGTGGCGAATGGAACTATGGgtatgtatcatgtatataaatgctaaagcat +1958 ttgtgtgtcaaagtgataaatagaatagaatattatattgatctgcaaattaatcgaata +2018 ttatatctataatgttcatatagaattagagaaaaaaacgaaatagaatagactattata +2078 tcgatctgcaaattaatcaaatattatatctatagtgttcatatagaataagaggaaaca +2138 agcgagcacactaaactactctagtttctttctataacattattatgtgtccatgcatgc +2198 atgttgaagtgctcactgtgttttgttgttttctaaaacaaatgccaaatgtgcagaGGA +2258 CTTCCAGCTTGGCTACGCGACATCCCTGGAATGCAGTTTAGGCTGCATAATGAGCCTTTT +2318 GAGgttaaataataataataataataaaattctcatctatttttgtgtacttttacatat +2378 actagcatataattaatgcaagtgtttttttccatgatatagaATGAGATGGAGACATTC +2438 ACCACTCTTATAGTTAACAAGATGAAGGATTCAAAAATGTTTGCTGAACAAGGAGGACCG +2498 ATCATCCTTGCTCAGgtattgtaatgatcattcttcaatatgattgaacaatgggaaatt +2558 agcatgttaataatttgtactattgtcattccacaatatatattgtcaattaatatcaat +2618 gcattaatggatcaatgcacagattGAGAATGAGTATGGAAACATCATGGGGAAATTAAA +2678 CAACAACCAGTCTGCATCTGAATACATCCACTGGTGTGCTGACATGGCGAACAAGCAGAA +2738 CGTCGGTGTCCCATGGATCATGTGTCAACAAGACGACGATGTGCCGCACAATgtggtgag +2798 catgggttttaatcccacaagaatatagaatattatatgaatttatttgtttatcactca +2858 tctaataacatgagtttgtcattgttttggaccgctctagGTCAATACCTGTAATGGATT +2918 CTATTGCCATGACTGGTTTCCAAATAGGACAGGCATCCCTAAGATTTGGACAGAGAACTG +2978 GACTGGCTGgtatttttttttcttccattagtatttctctcattgtttacaaaattaact +3038 tttagtacatatatctctttgtttgcaaaattattttttgatgaacatggaggagattta +3098 tcttaatttgttgatgtacttaacgttagGTTCAAAGCTTGGGACAAGCCGGATTTCCAT +3158 AGGTCAGCTGAAGACATTGCTTTTGCGGTTGCGATGTTCTTCCAAAAGCGTGGATCTCTG +3218 CAAAATTACTATATGgtatgctggctagcttgtatctctttcacaatgactgaattttcg +3278 ttgatttatgctgagttttttttttccattttttgttagtaccatGGTGGAACCAACTTT +3338 GGTCGTACCTCCGGAGGTCCGTACATCACAACAAGCTATGATTATGACGCGCCTTTGGAT download by : skknchat@gmail.com
47 +3398 GAGTATGgtaagctttgattaatatattttaccgtactgttaattatatggtgaatttga +3458 ataagaaagcaattttttgtcttattttaattataatcttgttggtctacttttgattta +3518 ttacagGTAATCTCAGGCAACCCAAATATGGTCACTTGAAGGAACTCCACTCCGTGCTCA +3578 AGTCCATGGAGAAAACTCTTGTCCATGGAGAGTATTTTGACACCAACTATGGCGATAACA +3638 TCACAgtaatattcagatcacgcccttcttttaatcaaaattatcacgtctaatgcaaac +3698 ATATCTAATGCATGCATATTGGTACTATCTCTGATCAATGTAGGTTACCAAGTACACTCT +3758 GGACTCCTCATCTGCTTGCTTCATCAACAACAGATTTGATGATAAAGATGTCAATGTGAC +3818 CCTCGATGGAGCCACTCACCTCCTGCCTGCATGGTCAGTCAGCATCTTGCCTGACTGCAA +3878 GACTGTTGCCTTCAATAGCGCCAAGgtatttttcctttctcaataatcaataatgaaatt +3938 aaaatgagaccaagtgtaaggtctataattcatctcttaattttgttttcctcttggtat +3998 gacctagattAAGACCCAGACGTCTGTCATGGTGAAGAAACCCAACACGGCGGAGCAGGA +4058 GCAGGAGAGCCTAAAATGGTCTTGGATGCCTGAAAACTTGAGTCCTTTCATGACCGATGA +4118 GAAGGGCAACTTTAGGAAGAATGAGCTCTTGGAGCAGATCGTCACGTCAACCGATCAAAG +4178 TGATTACCTGTGGTACAGAACAAGGTATTTTTTTAAAAAAAAAATCTCTTTATACTAAAG +4238 AAAAGAGATCATGATGATGTAAATTTGAAATGATTCCGACAAAAAAATATATATATGTTA +4298 CAAATTTAGAACGTCACCAACAAAAAAAAAATTGCAGTCTTAATCACAAAGGAGAAGGGA +4358 GCTACAAATTGTACGTGAACACGACTGGCCATGAACTTTATGCCTTTGTGAACGGGAAGC +4418 TTATTGgtgagtatcaaagttattttttttccatattttcgttgcaccattcttttaatt +4478 ctgtgtgggtcgaaattaaagaatgtttgtgaacctgcgggtcaaaattaaagaatgttc +4538 attgacaaacatgtgtgttcataatttgtcagGGAAAAACCATTCTGCCGATGGAGATTT +4598 TGTCTTCCAACTAGAGTCGCCGGTGAAGCTCCATGATGGCAAGAACTACATCTCTCTTCT +4658 GAGTGCAACCGTTGGCCTCAAGgttcctaattttctttcttgaatgctcacttccatcgt +4718 atcagcaacgaactcatcttctttatttgcaattaatcatgtataccagtgataaattgt +4778 ttgatcattcttggtaaacagAACTATGGCCCTTCGTTCGAAAAGATGCCCACGGGCATT +4838 GTTGGAGGCCCTGTTAAGCTGATAGACAGCAATGGCACCGCAATTGATCTCTCCAACAGC +4898 TCCTGGTCTTATAAGgttacacattatttttcatcaatgcttagttgtttgttaactttg +4958 ctggtattgatcatatagtgtttcttgctttgatgtttttttgtgttgtagGCTGGCTTG +5018 GCTAGTGAGTACAGGCAGATCCATCTTGACAAGCCAGGCTACAAATGGAATGGCAACAAT +5078 GGCACCATCCCCATCAACAGGCCTTTTACTTGGTACAAGgtacagtatatgtccattatt +5138 tactcactctctccggttttataattcttaacattctgaacaatgacataattttcaaaa +5198 tatatttctgactatatttctctattacaatatattaatataaatatatatatatattac +5258 ttttgttatagtactttgtaagtcaaatttatatatgttgttttggtgcctttaaactag +5318 atatttttaaagtcattattagttaatttataaaagtttaacctaaaacttatcaattat +5378 gaaactggagtaatttaattacctgtatgatttcatttcatcgtttcattctttcacctg +5438 caaaaataaaaggatttttaatactttttttgttttcttatgaagactacaatttactta +5498 atttaccttccctatgaaatttcatcatgtcattaattctttcaccgccaaaacaatctt +5558 aatactttggttacttttttttttgttatgaagGCTACATTTGAAGCTCCGTCCGGCGAG +5618 GACGCGGTGGTGGTGGACCTGCTGGGCTTGAACAAGGGCGTGGCGTGGGTGAACGGCAAC +5678 AACCTCGGCCGCTACTGGCCGTCGTACACGGCGGCGGAGATGGCCGGCTGCCACCGCTGC +5738 GACTACCGCGGCGCGTTCCAGGCGGAGGGCGACGGCACCAGGTGCCTCACGGGCTGCGGC +5798 GAGCCGTCGCAGCGCTACTACCACGTGCCGCGCTCCTTCCTCGCCGCCGGCGAGCCCAAC +5858 ACGCTGCTCCTCTTCGAGGAGGCCGGCGGCGACCCCTCGGGCGTCGCCCTCCGCACCGTG +5918 GTGCCCGGTGCCGTGTGCACCTCCGGCGAGGCCGGTGACGCCGTCACGCTGTCGTGCGGC +5978 GGCGGCCACGCCGTGTCGAGCGTCGACGTGGCCAGCTTCGGCGTGGGGCGCGGGCGGTGC +6038 GGCGGCTACGAGGGCGGGTGCGAGTCCAAGGCGGCGTACGAGGCGTTCACGGCGGCGTGC +6098 GTCGGGAAGGAGTCGTGCACGGTGGAGATCACCGGCGCGTTCGCCGGCGCCGGGTGCCTG +6158 TCCGGCGTGCTCACCGTCCAGGCCACTTGCTGAttgatctacatgcatatatatggagtg +6218 gccatgtctttgattaattaggtctttaattagtcgcttaattaggatggtttgtttatt +6278 gagttaagctggtagtcgcccctggtgcatgtgttaattcgggggtaaaaagtgagttta +6338 ttaattagggttctctgatcaactgttgattgcagagacgcagagtgtgatatatactgg +6398 gaccaaatatttcatctatgaagtacttttacgatcgagtggttaaacatgtgtgttaat +6458 gcccttg download by : skknchat@gmail.com
Protein sequence 1 MMGRRGSSWCRWWVALLVLAVAADAVGCTSVSYDDRSLVIDGQRRIILSGSIHYPRSTPE 61 MWPDLIKKAKEGGLDAIETYIFWNGHEPHRRQYNFEGNYDVVRFFKEIQNAGMYAILRIG 121 PYICGEWNYGGLPAWLRDIPGMQFRLHNEPFENEMETFTTLIVNKMKDSKMFAEQGGPII 181 LAQIENEYGNIMGKLNNNQSASEYIHWCADMANKQNVGVPWIMCQQDDDVPHNVVNTCNG 241 FYCHDWFPNRTGIPKIWTENWTGWFKAWDKPDFHRSAEDIAFAVAMFFQKRGSLQNYYMY 301 HGGTNFGRTSGGPYITTSYDYDAPLDEYGNLRQPKYGHLKELHSVLKSMEKTLVHGEYFD 361 TNYGDNITVTKYTLDSSSACFINNRFDDKDVNVTLDGATHLLPAWSVSILPDCKTVAFNS 421 AKIKTQTSVMVKKPNTAEQEQESLKWSWMPENLSPFMTDEKGNFRKNELLEQIVTSTDQS 481 DYLWYRTSLNHKGEGSYKLYVNTTGHELYAFVNGKLIGKNHSADGDFVFQLESPVKLHDG 541 KNYISLLSATVGLKNYGPSFEKMPTGIVGGPVKLIDSNGTAIDLSNSSWSYKAGLASEYR 601 QIHLDKPGYKWNGNNGTIPINRPFTWYKATFEAPSGEDAVVVDLLGLNKGVAWVNGNNLG 661 RYWPSYTAAEMAGCHRCDYRGAFQAEGDGTRCLTGCGEPSQRYYHVPRSFLAAGEPNTLL 721 LFEEAGGDPSGVALRTVVPGAVCTSGEAGDAVTLSCGGGHAVSSVDVASFGVGRGRCGGY 781 EGGCESKAAYEAFTAACVGKESCTVEITGAFAGAGCLSGVLTVQATC Trình tự promoter RMP1del ORIGIN -623 tgaagagacgaggggcattatcatctgatggaaaagaattctgatgccaagttaggagga -563 aaaatttgataatttaacgcttttttcattgtccaattactttaattgatatttttgtga -503 ggatgatatgtgagaccatatgagtgtatgaaagtgaaccagaatgtcaaataatcgaaa -443 cccattgaaaatagtgttaaattatcaaatctctcagttaggaggaggggatggagattg -383 tcttttctagttttagcactatccgcaaaaaaaaaagaaacggcacgcaatctcgatttt -323 acggctaaccactaattatcgtatcatacgtctttatcgtatgcatggcgatccggctta -263 actactttgtttgtttctctgtgcaatagtatctccaagattaacaaacccatgcccacg -203 tgtactacgtaattatcctctattgtatctatctccaacgtacggcgcatcgtatcgctg -143 cggccTATAAATtccgtatcacccccacgcccgatctctgcaattcgatcgcttgcatct -83 gcaaagttgcaactcatctcgtctcctcctctcctcccctcctcccctgtagcctagcta
RMP2 (Os01g0899100) ORIGIN -2056 atccttatccttctccatgaggattctgcgcagagcagcaagtcttctcctccatgtatg -1996 ccttcttttatttatttactctcacaaacccgctccaaatgttcaattgactgattttac -1936 tttactgagagtatgattttcagggccgtgcttacaacgcaggaagaaccacaaggctgc -1876 agggctcttttctaaggtactacttacccttcttgctgactctgttaaaaataaaagaag -1816 ctatatttcttaactacaatttacacaaattaagtaaatattgatgtgaaacctatatga -1756 ttttgctcaatcatgttctattaaaccattgatcagttggttcctagtcttttcagtaaa -1696 aaatgttatgatatctcaactcttcctatgtaatgttatggttacataggctgtgTTTAG
-1636 atctaAAGTTTGGATCCAAACTTcagtctttttccatcacatcaacctgtcatgcacacg -1576 taacttttcagtcacatcatctccaatttcaaccaaaatccaaactttgcgctgaactaa -1516 acacagccataatactccctccgtccctaaatgtttgacgccgttaacttttttaaacat -1456 gtttgaccgttcgtcttattcaaaaacttttgtgaaatatataaaattatatgtatacat -1396 aaaagtatatttaacaataaatcaaatgataggaaaagaattaataattacttaaatttt -1336 ttgaataagatgaacggtcaaatttgtttaaaaaaatcaaaggcgtcaaacatttaggga -1276 cggagggagtagtaattgatgcttatgagtccaccaatcaacgatggtacaatagcctgc -1216 cacttgacttgtccaccggtcgtcatggcttgtattgatgtgtcatgatttggattggtc -1156 tgtgcgattaggtgattataattacgatattgtggctatttatgacaggatttttttata -1096 atcttaaacttattataaacagcaagtacagaagcacagggttccattctttccattgca -1036 ttgatttttttttccctttaatgttcatgtcctgctaactgaaagatagtatcttggtcg -976 aatgtaaacaaatatacaatgtccacagagaaagagagattgtgcgcatgacttactaaa -916 ataaatctgattgatgttttccagaatgcatttagcaatagaattgattattctcatagc -856 atagtacttatttttatttattgagatgtttctgtttgtaagcaatattgagaacatata -796 agctaaaccatggagaatagcttccgacgtgcttctgccattcattacaccatgtttctt -736 tctttctttcgaggaccctgcaataaccatgagtctaaaagcatttgtcggcgttcctat -676 tattgtcatataatgattatcaactaagttatgatgtgatacacacacgccatcttcaac -616 ccacaagttattgccatgatggttagatcttcactgaaccaggagagtaacttaattata -556 taggcaaaagatatatattgtggagggaaaacttttagaagcacattttcttaaaaaaga -496 caaattttgatgtgttttttaagactaattttaggtaggttttactcatatgtatatcaa -436 tcatgaaaagagagctaggcaatggaagtggcaaaggaaaacctcaagaaataattttta -376 aaaccaaattctaaatttaaatatcaattgcagcttttaagaaaagttgtgccaagcgga -136 cccaaaaactgtcccttatttgctaccggtaccattacgaacgcccttaacaagccaaca -256 cgtcgttaaagacccaagcgattaaggattcagtaagctagagcaaaaatatgaaaaaag -196 aagttactatatctctgtctaTTATTTtctgatctgtgcaatcaactttacgaacagaaa -136 agttagagcaaaagaaaaaaatctagcatttcatcactcattaccctacatgttttaact -76