2. Mục tiêu của đề tài
2.4. Phân lập, tinh chế các hợp chất
Phần cao chiết EA (85 gam) tiến hành phân lập các chất trên sắc ký cột silica gel. Hòa tan lượng cao chiết EA trong ethyl acetate, sau đó cho cao chiết trộn với silica gel (Merck, cỡ hạt 63-20 µm), sấy khô và nghiền nhỏ. Nhồi cột khô silica gel (Merck, cỡ hạt 63-20 µm) vào cột sắc ký kích thước 10 x100 cm với 1 kg silicagel.
Ổn định cột bằng dung môi n-hexane. Hệ dung môi rửa giải là: n-hexane : acetone với tỉ lệ từ 25:1 – 1:2(v/v). Tiến hành sắc ký và thu được 6 phân đoạn. Tại phân đoạn 1, xuất hiện chất rắn vô định hình màu trắng, tiến hành lọc chât rắn và rửa lại với acetone thu được chất 2 (35 mg). Từ phân đoạn 5, tiến hành sắc ký cột silica gel, hệ dụng môi pha động là n-hexane/acetone với tỉ lệ là 10/1 và 1/1 (v/v) thu được 2 phân đoạn. Từ phân đoạn 5.1, tiến hành sắc ký pha đảo với hệ dung môi là acetone/nước tỉ lệ 30/70 đến 60/40 thu được chất rắn vô định hình có khối lượng 19 mg (chất 1). Các chất được làm khô để tiến hành đo phổ NMR và MS để xác định cấu trúc hợp chất và đánh giá hoạt tính sinh học (Sơ đồ 2.1).
Cao chiết EA (85 gam)
Phân đoạn 1 Phân đoạn 2 Phân đoạn 3 Phân đoạn 4 Phân đoạn 5 Phân đoạn 6
SKC Pha động: n-hexane/acetone với tỉ lệ 1:25 đến 1:2 (v/v) Chất 2 (35 mg) Lọc thu chất rắn Dịch lọc
Phân đoạn 5.2 Phân đoan 5.1
1 (19 mg) SKC Pha động: n-hexane/ acetone với tỉ lệ 10/1 – 1/1 (v/v) SKC 18, acetone/water (30/70-60/40)
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU