2. Mục tiêu của đề tài
2.2. Phương pháp xử lý mẫu thực vật, chiết tách và xác định cấu trúc các chất
2.2.3. Phương pháp định tính các nhóm hợp chất [3]
2.2.3.1. Định tính polyphenol [3.]
-Phản ứng với muối sắt (III).
Tùy theo số lượng và vị trí các nhóm hidroxyl trong phân tử polyphenol mà cho các màu lục, xanh hoặc nâu.
Khi nhỏ H2SO4 lên các dẫn xuất của flavone và flavonol thì cho màu vàng đậm; đối với chalcone và auron cho màu đỏ, đỏ thắm và đỏ tươi; flavanone cho màu đỏ da cam do sự chuyển thành chalcone.
2.2.3.2. Định tính các flavonoid[3.]
Thuốc thử: Dung dịch acid HCl đặc 36% và bột Mg kim loại.
Thí nghiệm: Lấy 0.05 g cặn chiết thêm 10 ml CH3OH, đun nóng cho tan và lọc qua giấy lọc. Lấy 2 ml nước lọc vào ống nghiệm, thêm một ít bột Mg kim loại, sau đó cho vào 5 giọt HCl đậm đặc, đun trong bình cách thuỷ vài phút và quan sát thấy dung dịch có màu từ vàng, đỏ đến xanh là dương tính với các flavonoid.
Hiện tượng: Dịch methanol có màu hồng. Khi thêm thuốc thử thì có màu hồng hơn.
2.2.3.3. Định tính alkaloid[3.]
* Các thuốc thử sử dụng. - Thuốc thử Dragendorff.
Dung dịch A: Hòa tan 0.05 g bismuth nitrate (Bi(NO3)3.5H2O) trong 20 ml dung dịch acetic acid 20%. Dung dịch B: 5 ml dung dịch KI 40% trong nước. Trước khi sử dụng, trộn 20 ml dung dịch A, 5 ml dung dịch B và 70 ml H2O.
- Thuốc thử Mayer.
Dung dịch A: hòa tan 1.36 g HgCl2 trong 60 ml H2O. Dung dịch B: Hòa tan 5 g KI trong 10 ml H2O. Trộn hai dung dịch lại, thêm nước vừa đủ 100ml.
* Thí nghiệm: Lấy 0.05 g cặn chiết cho thêm 5 ml H2SO4 5%, khuấy đều, lọc qua giấy lọc. Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml nước lọc acid rồi thêm:
+ Ống 1: 1-2 giọt thuốc thử Dragendorff, xuất hiện màu da cam là phản ứng dương tính.
+ Ống 2: 3-5 giọt thuốc thử Mayer thấy xuất hiện kết tủa trắng là dương tính. * Hiện tượng:
2.2.3.4. Định tính các Courmarin[3]
* Thuốc thử: Dung dịch NaOH 10%.
* Thí nghiệm: Lấy vào 2 ống nghiệm mỗi ống 2 ml dịch thử, cho vào một trong hai ống đó 0.5 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cả hai ống trên bếp cách thuỷ đến sôi, lấy ra để nguội cho thêm 4 ml nước cất. Nếu chất lỏng ở ống có kiềm trong hơn ống không kiềm có thể xem là dương tính. Nếu đem acid hoá ống nghiệm có kiềm bằng một vài giọt HCl đậm đặc mà làm cho dịch đang trong suốt hoặc có màu vàng xuất hiện vẩn đục và có thể tạo ra kết tủa là dương tính.
2.2.3.5. Phản ứng của Steroid[3.]
Phản ứng Liebermann - Burchardt: Cho vào ống nghiệm có chứa cặn glycoside tim 1 ml anhydride acetic, lắc đều cho tan hết cặn. Nghiêng ống 45°. Cho từ từ theo thành ống 0.5 ml sulfuric acid đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống. Ở mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng sẽ xuất hiện một vòng màu tím đỏ. Lớp chất lỏng phía dưới có màu hồng, lớp trên có màu xanh lá.