CHƢƠNG 2 PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM
2.3 Chức năng hóa hạt nano vàng với kháng thể
Hạt nano vàng sau khi chế tạo bằng phƣơng pháp điện hóa đƣợc ly tâm nhẹ 2.000 vòng/phút trong 5 phút để lấy nƣớc nổi và loại bỏ hoàn toàn lắng cặn do chất bám dính (nếu có). Sau đó tiếp tục ly tâm 8.000 vòng/phút trong 10 phút để lấy kết tủa đặc và loại bỏ nƣớc nổi, quá trình này đƣợc lặp lại 3 lần sau khi hòa tan trong nƣớc cất 2 lần nhằm loại bỏ hoàn toàn những hạt siêu nhỏ và những chất tồn dƣ (nếu có) để đảm bảo nano vàng sạch hoàn toàn trong nƣớc cất. Nano
Thanh vàng Natri citrate trong nước cất 2 lần 7 cm
vàng lúc chế tạo theo phƣơng pháp điện hóa mô tả ở trên sẽ có một lớp citrate mỏng bao bọc bao quanh giúp các hạt nano vàng ổn định trong nƣớc.
Hạt nano vàng sau đó đƣợc pha loãng và gắn với kháng thể để tạo thành phức hợp nano vàng – kháng thể trên cơ sở sự hấp phụ vật lý trong điều kiện pH và nhiệt độ nhất định. Bovine serum albumin (BSA) sử dụng đƣợc nhỏ thêm vào dung dịch chứa phức hợp nano vàng – kháng thể nhằm lấp đầy và khóa các vị trí trống trên bề mặt hạt nano sau khi kháng thể đã gắn chặt chẽ lên bề mặt hạt (Hình 2.2). BSA giúp ngăn chặn việc bắt cặp không đặc hiệu trên bề mặt hạt vàng khi phản ứng đặc hiệu giữa kháng nguyên-kháng thể xảy ra [29].
H nh 2.2 Quy trình gắn kháng thể với hạt nano vàng [29]
Việc tạo phức hợp hạt nano vàng-kháng thể đƣợc thực hiện nhƣ sau: Bƣớc 1: Chuẩn bị dung dịch hạt nano vàng ở nồng độ 200 µg/mL
Bƣớc 2: Kháng thể đƣợc thêm vào dung dịch trên theo nồng độ thích hợp, trộn nhanh và ủ ở nhiệt độ phòng.
BSA trong thí nghiệm này sẽ ngăn chặn sự bắt cặp không đặc hiệu với kháng nguyên hoặc che phủ những vị trí gắn kết không đặc hiệu.
Bƣớc 4: Dung dịch chứa phức hợp nano vàng-kháng thể đƣợc ly tâm ở 8.000 vòng/5 phút ở 4C, thu kết tủa và loại bỏ phần dịch nổi chứa chất phản ứng dƣ thừa. Phần tủa chính là các hạt vàng đã gắn kháng thể và đƣợc khóa bằng BSA Bƣớc 5: Rửa phần kết tủa thu đƣợc lặp lại 2 lần với 20 mM natri borate chứa 1% BSA, sau đó thu lại bằng li tâm ở 8.000 vòng/5 phút, thu tủa, loại bỏ dịch Bƣớc 6: Hòa tan phức hợp nano vàng-kháng thể trong đệm chứa: 2% BSA, 3% sucrose, 0,6 M NaCl, 0,2% Tween 20.