Phức hợp kháng thể - hạt nano vàng đƣợc tạo thành theo nguyên lý hấp phụ vật lý một cách thụ động thông qua tƣơng tác tĩnh điện giữa các nhóm mang điện trên kháng thể và bề mặt hạt nano vàng. Một số nghiên cứu trƣớc đây đã chỉ ra rằng khả năng hấp phụ tốt nhất ở điều kiện pH bằng hoặc lớn hơn điểm đẳng điện (pI) của kháng thể. Do đó, pH là điều kiện quan trọng ảnh hƣởng đến hiệu suất cộng hợp giữa kháng thể và hạt nano vàng [4], [29], [45]. Trong khi đó, kháng thể đã đƣợc chứng minh có giá trị điểm đẳng điện nằm trong khoảng pH 6,0 – 8,5. Để xác định giá trị pH thích hợp để tạo cộng hợp, dung dịch nano vàng đã đƣợc thay đổi các giá trị pH khác nhau. Kết quả đã cho thấy rằng tại pH 6,0 trên vạch đối chứng không xuất hiện tín hiệu. Tuy nhiên, từ pH 7,0 thì tín hiệu đậm dần và rõ ràng nhất ở pH7,5 – pH8,0. Tại giá trị pH 8,5 cũng xuất hiện vạch màu nhƣng mờ và to hơn các vạch màu ở độ pH thấp hơn. Nhƣ vậy, giá trị pH 7,5 đƣợc nhóm nghiên cứu lựa chọn để tiến hành các thử nghiệm tiếp theo.
3.2.3.Xác định thời gian tạo phức hợp nano vàng – kháng thể
Một trong những yếu tố quan trọng có khả năng ảnh hƣởng đến khả năng gắn kết của kháng thể lên bề mặt hạt nano vàng và duy trì hoạt tính của chúng sau khi gắn kết, đó là thời gian để hình thành phức hợp. Quá trình tạo phức hợp nano vàng – kháng thể nếu quá nhanh thì không đủ để các phần tử kháng thểm hấp phụ lên trên bề mặt hạt nano vàng. Tuy nhiên, để lâu dƣới ánh sáng và nhiệt độ cao cũng có thể dẫn tới khả năng kết tụ hoặc làm mất hoạt tính của kháng thể. Nghiên cứu này đƣợc thực hiện để xác định ảnh hƣởng của thời gian đến quá trình tạo phức hợp giữa kháng thể với nano vàng ở thời gian 10, 30, và 60 phút ở nhiệt độ phòng. Kết quả nghiên cứu cho thấy sau khi ủ 10 phút phức hợp không tạo ra vạch màu trên que thử nghiệm mà chúng chỉ hình thành đối với phức hợp ủ 30 phút và rõ ràng hơn ở 60 phút. Kết quả này cho thấy rằng thời gian ủ để tạo thành phức hợp nano vàng – kháng thể ít nhất phải 30 phút trở lên. Tuy nhiên, do thời gian và điều kiện thí nghiệm chƣa cho phép nên thí nghiệm chƣa tiến hành đƣợc khi ủ ở thời gian lâu hơn.
3.2.4.Nhiệt độ tạo phức hợp
Thông thƣờng, kháng thể duy trì hoạt tính tốt khi đƣợc bảo quản ở nhiệt độ 2- 80C trƣớc khi sử dụng. Bản chất của kháng thể là protein nên nhiệt độ có ảnh hƣởng rất lớn đến hoạt tính của chúng. Nghiên cứu tạo cộng hợp đã đƣợc tiến hành ở các nhiệt độ 4C, 25C, 37C trong 60 phút. Kết quả cho thấy rằng, vạch màu xuất hiện một cách rõ ràng khi thử nghiệm với phức hợp ủ ở nhiệt độ 250
C và 370C mà không thấy xuất hiện ở phức hợp khi ủ tại 40C. Nhƣ vậy, điều kiện thuận lợi khi tạo phức hợp ở nhiệt độ phòng trong thời gian 30 – 60 phút.
Hình 3.10. Sự hình thành vạch màu phụ thuộc nhiệt độ ủ giữa nano vàng – kháng thể