CHƢƠNG 2 PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM
2.4. Tạo que thử để phát hiện vi khuẩn tụ cầu vàng bằng phép đo màu
Máy CAMAG Linomat đƣợc sử dụng để phun tạo vạch kháng thể kháng vi khuẩn tụ cầu vàng lên trên màng nitrocellulose (Hình 2.3). Tốc độ phun đƣợc thiết lập 90 µL/giây với nồng độ kháng thể là 1µg/vạch. Quy trình này đƣợc thực hiện theo thƣờng quy phòng thí nghiệm.
Kháng thể đƣợc pha trong dung dịch đệm thích hợp sau đó phun lên màng nitrocellulose ở 2 vị trí đánh dấu tƣơng ứng với nồng độ 1 µg/mL:
+ Kháng thể kháng tụ cầu vàng ở vị trí kiểm tra (T) với .
+ Kháng thể kháng lại kháng thể tụ cầu vàng gắn với hạt nano vàng ở vị trí đối chứng (C).
Khi vi khuẩn khi đi qua tấm cộng hợp chứa phức hợp nano vàng – kháng thể, chúng sẽ gắn đặc hiệu với kháng thể gắn trên các hạt nano vàng để tạo thành phức vi khuẩn – kháng thể - hạt nano vàng (VK-Ab-AuNPs) và tiếp tục di chuyển vào phần màng nitrocellulose. Toàn bộ phức này sẽ tiếp tục đi qua vị trí kiểm tra và vị trí đối chứng theo quy luật mao dẫn.
Hình 2.3. Máy phun vạch kháng thể lên màng nitrocellulose tại Viện Công nghệ sinh học và Công nghệ thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội
Nếu trên màng nitrocellulose xuất hiện 2 vạch màu tạ vị trí vạch kiểm tra hay vạch phản ứng (T) và vạch đối chứng (C) thì kết quả là dƣơng tính, nếu chỉ xuất hiện 1 vạch ở vạch đối chứng thì kết quả là âm tính. Điều này đồng nghĩa với việc phức hợp nano vàng – kháng thể đƣợc gắn kết tốt. Ngƣợc lại, không có vạch nào xuất hiện thì coi nhƣ phức hợp không thành công. Nếu chỉ xuất hiện 1 vạch ở vạch kiểm tra thì kết quả phức hợp chƣa chắc chắn hoặc có sự sai hỏng trong quá trình tạo que thử hoặc phức hợp
Hình 2.4. Nguyên lý tạo que thử sắc ký miễn dịch [29]
2.5 Đánh giá yếu tố ảnh hƣởng tạo phức hợp nano vàng – kháng thể