Trên cơ sở 25 chủng xạ khuẩn nội sinh đã thu nhận đƣợc, tiến hành phân tích, đánh giá mức độ đa dạng sinh học theo tỉ lệ xạ khuẩn trên bộ phận cây Màng tang (Hình 3.2).
Hình 3.2. Tỷ lệ xạ khuẩn nội sinh phân bố trên các bộ phận của cây Màng tang
Kết quả hình 3.2 cho thấy, xạ khuẩn có mặt ở tất cả các bộ phận của cây, trong đó số chủng xạ khuẩn phân lập từ rễ là cao nhất (đạt 40%); tiếp theo là thân (32%) và thấp nhất là lá (28%). Kết quả trên có chút khác biệt so với nghiên cứu của Zhao và cộng sự đã phân lập đƣợc 560 chủng xạ khuẩn từ 26 cây dƣợc liệu khác nhau tại vùng cao nguyên Panxi, Trung Quốc. Tỷ lệ phân lập các chủng xạ khuẩn nội cộng sinh cao nhất ở rễ (58,2%), thân (27,8%) và lá (14,0%) [73]. Tƣơng tự, nhóm nghiên cứu của Madhuarama (2014) đã công bố công trình nghiên cứu đánh giá đa dạng và tiềm năng của xạ khuẩn nội sinh trong ba cây dƣợc liệu (cây lô hội, bạc hà, hƣơng nhu tía) ở
Ấn Độ, trong đó tỷ lệ xạ khuẩn phân lập từ rễ, thân, lá đạt lần lƣợt: 70,0%; 17,5% ; 12,5% [41]. Đa số các nghiên cứu trên thế giới đã nhận định rằng xạ khuẩn phân lập từ mẫu lá luôn thấp hơn so với rễ và thân và mật độ xạ khuẩn phần lớn phụ thuộc vào đặc điểm sinh học của cây.
3.2.2. Đa dạng xạ khuẩn trên cây Màng tang theo môi trường phân lập
Theo các nghiên cứu về xạ khuẩn nội sinh, phƣơng pháp xử lý mẫu và thành phần môi trƣờng là yếu tố chính quyết định đến kết quả phân lập, đánh giá sự đa dạng của xạ khuẩn nội sinh và tìm ra các loài xạ khuẩn mới [47]. Kết quả đánh giá đa dạng các chủng xạ khuẩn phân lập dựa trên 8 loại môi trƣờng đặc hiệu đƣợc thể hiện trên hình 3.3.
0 1 2 3 4 5
TWYE HV TA SPA STA SA CA ISP5 2 5 4 3 4 2 3 2
Môi trường phân lập
Hình 3.3. Tỷ lệ xạ khuẩn nội sinh trên cây Màng tang đƣợc phân lập trên các loại môi trƣờng khác nhau
Kết quả cho thấy, tỷ lệ xạ khuẩn phân lập cao nhất trên môi trƣờng HV, SPA, SA ( 4-5 chủng) đạt từ 16% đến 20 % tổng số chủng xạ khuẩn, tỷ lệ các chủng xạ khuẩn phân lập trên các môi trƣờng nhƣ TWYE, CA, ISP5 thấp (2 chủng), dƣới 10% (Hình 3.3). Trên đối tƣợng cây sồi (Callitris preissii), cây bạch đàn đỏ (Eucalyptus camaldulensis), cây bạch đàn trắng (Eucalyptus microcarpa), cây son (Pittosporum phylliraeoides), Onuma và cộng sự đã phân lập 574 chủng xạ khuẩn từ 10 loại môi trƣờng có tỷ lệ phân lập xạ khuẩn lần lƣợt: MMY (5,5%), YECG (5,9%), HVA (9,4%), Xyl (10,1%), CMC (14,4%), GGXA (11,8%), Pec (8,5%), GGAG (11,8%), AA (11,6%), HVG (11,0%). Kết quả phân tích trình tự gen 16s rDNA định danh 17 chi khác
nhau, trong đó chi Streptomyces chiếm tỷ lệ cao nhất (71,7%), tiếp đó là các chị xạ khuẩn hiếm nhƣ: Promicromonospora (8,9%), Pseudonocardia (6,3%),
Kribbella (4,3%), Nocardioides (1,9%), Nocardia (1,7%), Amycolatopsis
(1,0%), Micromonospora (1,0%), Actinomycetospora (1,0%),
Actinopolymorpha (0,4%), Actinomadura (0,3%), Polymorphospora (0,3%),
Williamsia (0,3%), Gordonia (0,2%), Nocardiopsis (0,2%), Nonomuraea
(0,2%) Flindersiella (0,2%) [48].
Cũng tƣơng tự nghiên cứu trên, Li và cộng sự (2012) đã phân loại 228 chủng xạ khuẩn thuộc 19 chi nhƣ: Promicromonospora (11,4%),
Pseudonocardia (6,6%), Nocardia (4,8%), Nonomuraea (4,4%), Rhodococcus
(3,5%), Kribbella (3,1%), Micromonospora (3,1%), Actinomadura (2,6%),
Streptosporangium (1,3%), Amycolatopsis (1,3%), Dactylosporangium
(0,9%), Blastococcus (0,4%), Glycomyces (0,4%), Kocuria (0,4%),
Micrococcus (0,4%), Gordonia (0,4%), Microbispora (0,4%),
Phytomonospora (0,4%) và Streptomyces chiếm 53,9% trên sáu loại môi trƣờng đặc hiệu [37].
Nhìn chung, tỷ lệ phân lập xạ khuẩn nội sinh thuộc chi Streptomyces
luôn chiếm tỷ lệ cao (>50%) nên các nhóm nghiên cứu trên thế giới luôn ƣu tiên sử dụng các phƣơng pháp, lựa chọn các loại môi trƣờng đặc hiệu nhằm phân lập các chủng xạ khuẩn hiếm không thuộc chi Streptomyces.
3.2.3. Đa dạng xạ khuẩn nội sinh đánh giá theo nhóm màu khuẩn ty
Sự khác biệt về màu sắc hệ khuẩn ty xạ khuẩn đƣợc hình thành do nhiều nguyên nhân khác nhau nhƣ: khí hậu, nhiệt độ, độ ẩm, chất dinh dƣỡng, pH... Chính vì vậy, mầu sắc khuẩn ty đƣợc coi là tiêu chí cơ bản để chọn lọc các chủng xạ khuẩn trên môi trƣờng phân lập, tránh chọn lọc các chủng có cùng đặc điểm hình thái, màu sắc giống nhau… Kết quả phân nhóm xạ khuẩn nội sinh phân lập đƣợc trên các mẫu Màng tang trong nghiên cứu đƣợc thể hiện trên hình 3.4.
0 2 4 6 8 10 Trắng Vàng Xám Xanh Đỏ Nâu Tím 10 10 3 2 0 0 0 Nhóm màu
Hình 3.4. Tỷ lệ các chủng xạ khuẩn nội sinh đƣợc phân theo nhóm màu Trên cơ sở 25 chủng xạ khuẩn đã đƣợc phân lập và thuần khiết, các chủng có màu sắc hệ khuẩn ty thuộc 4/7 nhóm màu xuất hiện với tỷ lệ khác nhau (Hình 4). Theo đó, xạ khuẩn thuộc nhóm màu vàng là 10 chủng đạt (40%), và trắng là 10 chủng đạt (40%) chiếm ƣu thế, tiếp theo xám là 3 chủng đạt (12%), và thấp nhất là xanh 2 chủng đạt (8%) và không phát hiện xạ khuẩn thuộc nhóm màu đỏ, nâu hay tím. Kết quả trên cũng gần giống với kết quả nghiên cứu của một số tác giả khi phân lập xạ khuẩn từ đất và biển cũng nhận thấy nhóm màu trắng thƣờng chiếm tỷ lệ cao hơn [4], [20].
Tuy nhiên, màu sắc của khuẩn ty khí sinh hay khuẩn ty cơ chất là đặc điểm dễ thay đổi, phụ thuộc vào thành phần môi trƣờng dinh dƣỡng, tuổi của chủng và các điều kiện vật lý. Kết quả phân lập và đánh giá đa dạng của xạ khuẩn nội sinh chứng tỏ Màng tang là cây chủ có nhiều loài xạ khuẩn nội sinh tồn tại và phát triển và kết quả cũng chỉ ra đây là những khảo sát đầu tiên về xạ khuẩn nội sinh trên cây Màng tang tại Việt Nam.
3.3. Khả năng sinh kháng sinh của các chủng xạ khuẩn nội sinh
3.3.1. Khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của xạ khuẩn
Theo các nghiên cứu công bố trên thế giới, xạ khuẩn nội sinh phân lập từ các cây dƣợc liệu (đặc biệt là loại chứa tinh dầu hoặc chất kháng vi sinh vật) có tỷ lệ kháng vi sinh vật cao. Ngoài ra, các chủng xạ khuẩn này có khả năng kháng các chất kháng sinh, chất ức chế vi sinh vật nội tại trong các cây
dƣợc liệu [23]. Kết quả nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của 25 chủng xạ khuẩn nội sinh phân lập từ cây Màng tang đƣợc tổng hợp trong bảng 3.2 và bảng 3.3.
Bảng 3.2. Số liệu thống kê khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của 25 chủng xạ khuẩn nội sinh phân lập từ cây Màng tang
Chủng vi sinh vật kiểm định
Xạ khuẩn kháng vi sinh vật kiểm định Số lƣợng Tỷ lệ (%) Gram (-)
Escherichia coli ATCC 11105 2 8,0
Proteus vulgaris CNLM 10 40,0
Salmonellaenterica ATCC 14028 5 20,0
Pseudomonas aeruginosa CNLM 12 48,0
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 2 8,0
Gram (+)
Sarcina lutea CNLM 2 8,0
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 11 44,0
Bacillus cereus ATCC 11778 12 48,0
Kiểm tra phổ kháng khuẩn của 25 chủng xạ khuẩn trên 8 chủng VSV kiểm định (vi khuẩn Gram -, Gram +) cho thấy, các chủng ức chế sự phát triển của vi sinh vật kiểm định ở mức độ khác nhau (Bảng 1, Hình 5). Trong số 25 chủng xạ khuẩn, 14 chủng (56%) có khả năng kháng ít nhất 1 chủng VSV kiểm định. Trong đó, 2 chủng kháng Escherichia coli ATCC 11105 (chiếm 8,0 %); 10 chủng kháng Proteus vulgaris CNLM (chiếm 40,0 %); 5 chủng kháng
Salmonella enterica ATCC 14028 (chiếm 20,0%) ; 12 chủng kháng
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 (chiếm 8,0%); 2 chủng kháng Sarcina lutea CNLM (chiếm 8,0%); 11 chủng kháng Staphylococcus epidermidis
ATCC 12228 (chiếm 44,0%); 12 chủng kháng Bacillus cereus ATCC 11778 (chiếm 48,0%). Sáu chủng thể hiện phổ kháng khuẩn rộng cùng kháng ít nhất 4 loại vi sinh vật kiểm định. Các kết quả trên cho thấy tính đa dạng trong khả năng kháng vi sinh vật gây bệnh của các xạ khuẩn nội sinh phân lập trên cây Màng tang.
Hình 3.5. Hoạt tính kháng Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (A)
Bacillus cereus ATCC 11778 (B) của các chủng xạ khuẩn nội sinh
Bảng 3.3. Khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của các chủng xạ khuẩn
STT Kí hiệu chủng Đƣờng kính vòng kháng khuẩn (D-d, mm)* 1 2 3 4 5 6 7 8 1 MPT08 12,53 ± 0,25 17,43 ± 0,57 13,06 ± 0,4 21,0 ± 0,1 7,06 ± 0,5 12,53 ±0,25 23,60 ± 0,1 16,93 ±0,05 2 MPT14 0 14,96 ± 0,11 0 16,06 ± 0,30 0 0 19,16 ± 0,57 14,33± 0,20 3 MPT21 0 14,30 ± 0,26 0 14,36 ± 0,47 0 0 18,83 ±0,57 13,46 ±0,05 4 MPT22 0 13,86 ± 0,58 0 14,66 ± 0,11 0 0 0 12,70 ± 0,26 5 MPT25 0 15,03 ± 0,20 12,93 ± 0,45 18,20 ± 0,30 0 0 22,23 ± 0,63 15,73 ± 0,46 6 MPT26 0 0 0 0 0 0 9,16 0
±0,11 7 MPT28 7,96 ± 0,11 10,13 ± 0,25 16,0 ± 0,36 23,60 ± 0,65 12,43 ± 0,11 7,96 ± 0,11 32,50 ± 0,10 0 8 MPT29 0 6,20 ± 0,30 0 12,26 ± 0,30 0 0 14,43 ± 0,55 8,53 ± 0,25 9 MPT30 0 0 0 0 0 0 13,73 ± 0,25 7,63 ± 0,47 10 MPT33 0 18,93 ± 0,15 0 20,00 ± 0,15 0 0 20,30 ± 0,34 17,13 ± 0,20 11 MPT34 0 9,93 0,15± 0 12,66 ± 0,15 0 0 0 5,90 ± 0,10 12 MPT35 0 0 0 18,70± 0,15 0 0 10,96 ± 0,05 9,83 ± 0,15 13 MPT37 0 16,06 ± 0,15 14,03 ± 0,11 19,60 ± 0,43 0 0 0 17,73 ± 0,05 14 MPT45 0 0 15,03 ± 0,23 20,60 ± 0,55 0 0 14,90 ± 0,26 10,53 ± 0,55
Ghi chú: 1. Escherichia coli ATCC 11105, 2. Proteus vulgaris CNLM, 3.
Salmonella enterica ATCC 14028, 4. Pseudomonas aeruginosa CNLM, 5.
Enterobacter aerogenes ATCC 13048, 6. Sarcina lutea CNLM, 7. Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, 8. Bacillus cereus ATCC 11778.
* Số liệu thể hiện đường kính vòng kháng khuẩn của ba thí nghiệm độc lập
Nhiều kết quả nghiên cứu trên thế giới đã chứng minh khả năng kháng vi sinh vật của các chủng xạ khuẩn nội sinh. Theo Zhao và đồng tác giả (2005), khi phân lập 560 chủng xạ khuẩn từ 26 cây dƣợc liệu tại cao nguyên Panxi, Trung Quốc có 60 chủng thuộc chi Streptomyces thể hiện hoạt tính kháng ít nhất một loại vi sinh vật kiểm định (chiếm 10,7%) [73]. Năm 2008, Li và cộng sự đã công bố phân lập đƣợc 41 chủng xạ khuẩn nội sinh thuộc chi
Streptomyces trên một số cây dƣợc liệu thu thập từ rừng nhiệt đới Xishuangbanna, tỉnh Vân Nam, Trung Quốc. Đã thu nhận 65,9% chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng E. coli; 24,4% kháng lại Staphylococcus aureus; 31,7% kháng S. epidermidis, 12,2% kháng C. albicans và các chủng không
thể hiện hoạt tính kháng Klebsiella pneumoniae [36]. Tại Việt Nam, rất ít nghiên cứu về khả năng kháng vi sinh vật của xạ khuẩn nội sinh trên cây Màng tang đƣợc công bố. Kết quả thu đƣợc trong công trình nghiên cứu này đã chỉ ra rằng xạ khuẩn nội sinh trên cây Màng tang là nguồn kháng sinh có tiềm năng ứng dụng trong điều trị nhiễm khuẩn gây bệnh.
3.3.2. Xác định gen mã hóa polyketide synthases (PKS-I, PKS-II) và nonribosomal peptide synthetase (NRPS) tham gia sinh tổng hợp kháng nonribosomal peptide synthetase (NRPS) tham gia sinh tổng hợp kháng sinh
Theo nhiều tài liệu trên thế giới công bố, một số sản phẩm trao đổi chất bậc hai có hoạt tính kháng sinh, kháng ung thƣ…của xạ khuẩn đƣợc tổng hợp bởi 3 nhóm enzyme chính là PKS-I, PKS-II và NRPS. Do đó, đánh giá các gen liên quan đến quá trình tổng hợp kháng sinh và phân tích trình tự gen có thể dự đoán cấu trúc nhóm kháng sinh do xạ khuẩn sinh ra [29]. DNA tổng số của 14 chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng ít nhất một loại vi sinh vật kiểm định sau khi xử lý với RNase đƣợc kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1,0% đƣợc trình bày trong Phụ lục 2, và sử dụng làm khuôn cho phản ứng PCR khuếch đại gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS. Kết quả thể hiện trên hình 3.6 và hình 3.7.
Hình 3. 6. Sản phẩm PCR khuếch đại gen pks-I, pks-II của một số chủng xạ khuẩn nội sinh đại diện
Băng M (A, B) thang DNA chuẩn 1(kb), băng 1-2 (A) sản phẩm PCR khuếch đại gen pks-I lần lượt của các chủng MPT33, MPT08; Băng 1-7 (B): Sản phẩm PCR khuếch đại gen pks-II lần lượt của các chủng MPT28, MPT08, MPT30, MPT34, MPT35, MPT14, MPT26
Hình 3. 7. Sản phẩm PCR khuếch đại gen nrps của một số chủng xạ khuẩn nội sinh đại diện
Băng M: thang DNA chuẩn 1(kb), băng 1-7: Sản phẩm PCR khuếch đại gen nrps lần lượt của các chủng MPT26, MPT33, MPT21, MPT22, MPT30, MPT25, MPT28.
Kết quả trình bày ở (3.6 và 3.7) cho thấy sản phẩm PCR khuếch đại gen liên quan đến tổng hợp kháng sinh của 14 chủng xạ khuẩn cho băng DNA có kích thƣớc khoảng 1400 bp đối với gen (pks-I), 600 bp (pks-II), 750 bp (nrps). Điều đó cho thấy 3 cặp mồi (K1F/M6R; A3F/A7R; KSαF/KSαR) đƣợc thiết kế trong thí nghiệm là phù hợp.
Xác định đƣợc 8 chủng mang gen pks-I (chiếm 57,1%), 11 chủng mang gen pks-II (chiếm 78,6%), và 11 chủng mang gen nrps (chiếm 78,6%) trên tổng số 14 chủng thí nghiệm. Trong đó, các chủng MPT08, MPT33, MPT35, MPT25, MPT26, MPT30 có mặt cả ba loại gen trên và 2 chủng MPT29, MPT37 không thể khuếch đại đƣợc một số các gen trên mặc dù thể hiện hoạt tính kháng VSV kiểm định (Bảng 3.4).
Kết quả mà nghiên cứu này thu đƣợc khác với công bố của Zhao và cộng sự (2011), gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS đã đƣợc phát hiện với tỷ lệ cao, đạt lần lƣợt 53,0%, 82,0%, 53,0% trên tổng số 60 mẫu DNA từ xạ khuẩn.
Trong đó, chủng SAUK6023 chứa cả ba loại gen trên và bốn chủng SAUK6113, SAUK6114, SAUK6013, SAUK6033 không có gen mã hóa PKS-I, PKS-II,, NRPS mặc dù có hoạt tính kháng khuẩn [72]. Các nghiên cứu sử dụng ba cặp mồi trên nhằm đánh giá đa dạng gen liên quan đến khả năng tổng hợp chất kháng sinh, kháng ung thƣ của xạ khuẩn nội sinh. Một số chủng chƣa khuếch đại đƣợc gen liên quan có thể các cặp mồi suy biến sử dụng trong nghiên chƣa phù hợp hoặc đã có những đột biến tại điểm bắt cặp của các mồi.
Bảng 3.4. Khuếch đại gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS và khả năng sinh anthracycline của 14 chủng xạ khuẩn nội sinh
STT Kí hiệu chủng PKS-I PKS-II NRPS Anthracycline
1 MPT08 + + + + 2 MPT14 + + - - 3 MPT21 - + + + 4 MPT22 - + + - 5 MPT25 + + + + 6 MPT26 + + + - 7 MPT28 - + + + 8 MPT29 - - - - 9 MPT30 + + + + 10 MPT33 + + + + 11 MPT34 - + + - 12 MPT35 + + + - 13 MPT37 - - - + 14 MPT45 + - + +
Ghi chú: +: dương tính; -: âm tính
3.3.3. Khả năng sinh tổng hợp chất thuộc nhóm anthracycline
Một trong những nhóm kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn (S. olivaceus, S. glaucescens, S. peusetius) hiện đang đƣợc sử dụng để điều trị nhiều loại ung thƣ thuộc nhóm anthracycline. Để đánh giá liệu 14 chủng
tuyển chọn có khả năng sinh anthracycline hay không, các phép thử đặc hiệu với nhóm hợp chất này dựa trên thử nghiệm biến đổi màu tại điều kiện pH acid và kèm theo phƣơng pháp của Trease và Evans (1996) [67]. Quan sát màu sắc quanh hai bề mặt khuẩn lạc có nhỏ dung dịch acid và kiềm trên đĩa thạch cho thấy trong 14 chủng nghiên cứu có 8 chủng thể hiện phản ứng chuyển màu da cam khi có pH acid và màu tím khi có pH kiềm. Nhƣ vậy rất có thể hợp chất do 8 chủng xạ khuẩn này sinh ra thuộc nhóm kháng sinh anthracycline
3.4. Đặc điểm sinh học và phân loại của chủng xạ khuẩn MPT28
Với mục tiêu tuyển chọn chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng vi sinh vật cao ứng dụng trong công nghệ y dƣợc học, chủng MPT28 thể hiện phổ kháng mạnh, rộng với các chủng vi sinh vật kiểm định (Bảng 3.5). Đồng thời, chủng MPT28 mang gen mã hóa PKS-II, NRPS dƣơng tính với phản ứng nhận biết nhóm kháng sinh anthracycline nên đƣợc tuyển chọn cho những nghiên cứu sâu hơn.
Bảng 3.5. Khả năng kháng vi sinh vật kiểm định của chủng MPT28
Chủng vi sinh vật kiểm định Đƣờng kính vòng kháng khuẩn (D-d,mm)*
Gram (-)
Escherichia coli ATCC 11105 7,96
Proteus vulgaris CNLM 10,13
Salmonellaenterica ATCC 14028 16,0
Pseudomonas aeruginosa CNLM 23,60
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 12,43
Gram (+)
Sarcina lutea CNLM 7,96
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 32,50
Ghi chú: * số liệu thể hiện đường kính vòng kháng khuẩn trung bình của ba thí nghiệm độc lập
3.4.1. Đặc điểm sinh học chủng xạ khuẩn MPT28
3.4.1.1. Đặc điểm hình thái và bề mặt chuỗi bào tử
Xạ khuẩn đƣợc phân thành 7 nhóm theo màu sắc khuẩn ty khí sinh gồm: trắng, vàng, đỏ, tím, xám, xanh, xanh da trời... Màu sắc của KTKS, KTCC và đặc điểm chuỗi bào tử đƣợc sử dụng tiêu chuẩn cơ bản để nghiên cứu đặc điểm của xạ khuẩn MPT28 (Bảng 3.6; Hình 3.8).
Bảng 3.6. Màu sắc khuẩn lạc của chủng MPT28 khi nuôi cấy trên các môi trƣờng khác nhau Môi trƣờng Khuẩn ty Sắc tố KTKS KTCC Sắc tố tan Melanin ISP1 Xám 2 fe Vàng 1 fb - - ISP2 Xám 2 fe Vàng 1 fb - - ISP3 Xám dc Vàng 1 db - - ISP4 Xám dc Vàng 1 ba - - ISP5 Xám 5 ih Vàng 1 ba - - ISP6 Xám 5 ih Vàng 1 db - - ISP7 Vàng 1 cb Vàng 2 db - -
A B
Hình 3. 8. Hình thái khuẩn lạc (A) trên môi trƣờng ISP1 và bề mặt chuỗi bào tử (B) dƣới kính hiển vi quang học có độ phóng đại 7.500 lần của chủng
MPT28
Kết quả ở bảng 3.6 và hình 3.8 cho thấy chủng MPT28 thuộc nhóm xạ khuẩn màu xám, không sinh melanin và sắc tố tan, chuỗi gồm 12-20 bào tử, cấu trúc cuống sinh bào tử dạng xoắn, bề mặt bào tử hình trụ, gai (sp).
3.4.1.2. Đặc điểm sinh hóa
Việc nghiên cứu khả năng sử dụng nguồn carbon, nitơ nhằm đánh giá