Làm tiêu bản vi khuẩn
+ Bước 1: Xử lý nhiệt lam kính: Đốt hai mặt lam kính trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội trước khi làm tiêu bản. Loại bỏ dầu, vết bẩn trên hai mặt lam kính.
+ Bước 2: Dàn tiêu bản: Từ khuẩn lạc vi khuẩn: Dùng que cấy vô trùng lấy một phần khuẩn lạc vi khuẩn hòa đều vào 1 giọt nước muối sinh lý vô trùng trên lam kính thứ nhất. Đốt khử trùng que cấy, để nguội rồi nhúng đầu que cấy vào giọt vi khuẩn sau đó dàn đều vi khuẩn sang lam kính thứ hai theo hình xoắn ốc từ trong ra ngoài.
+ Bước 3: Để khô tiêu bản: Tiêu bản được để khô tự nhiên hoặc hơ cao khoảng 20 cm trên ngọn lửa đèn cồn.
+ Bước 4: Cố định tiêu bản: Lật úp tiêu bản để mặt dàn vi khuẩn quay xuống dưới, đưa tiêu bản cắt ngang qua 2/3 trên của ngọn lửa đèn cồn từ 3 đến 4 lần.
Kỹ thuật nhuộm
+ Bước 1: Nhỏ dung dịch tím gentian phủ kín vết bôi, để 1 phút, rửa nhẹ tiêu bản bằng bình nón có vòi.
+ Bước 2: Nhỏ dung dịch lugol phủ kín vết bôi, để 30 giây, rửa nhẹ tiêu bản bằng bình nón có vòi.
+ Bước 3: Nhỏ vài giọt cồn 90° lên vết bôi, nghiêng tiêu bản để cồn láng từ cạnh nọ sang cạnh kia tiêu bản, láng cồn tới khi nào quan sát thấy màu tím trên tiêu bản vừa phai hết thì lập tức rửa nhẹ tiêu bản bằng bình nón có vòi.
+ Bước 4: Nhỏ dung dịch đỏ fuchsin phủ kín vết bôi, để 1 phút, rửa nhẹ tiêu bản bằng bình nón có vòi.
Đọc kết quả tiêu bản nhuộm trên kính hiển vi quang học vật kính dầu
- Vi khuẩn Gram (+): bắt màu tím. - Vi khuẩn Gram (-): bắt màu đỏ.