Phƣơng pháp ELISA đơn giản, nhƣng về hiệu quả của phƣơng pháp nhƣ độ nhạy, độ đặc hiệu, giới hạn phát hiện cho đến về thực nghiệm nhƣ thời gian thực hiện, độ phức tạp, chi phớ cũng nhƣ khả năng hệ thống húa thành bộ dụng cụ (KIT) để sản xuất cụng nghiệp. Chớnh vỡ vậy, ngƣời ta đó khụng ngừng cải tiến phƣơng pháp này, đƣa ra nhiều phƣơng pháp mới phự hợp với từng điều kiện, từng đối tƣợng khác nhau. Cho đến nay, đó cú rất nhiều biến thể của phƣơng pháp ELISA. Tuy nhiờn nhỡn chung, tất cả các biến thể này cú thể đƣợc phõn loại nhƣ sau:
Ag Primary antibody conjugate Direct ELISA Substrate Ag Primary antibody conjugate Substrate
Indirect ELISA Competitive ELISA
Ag Primary antibody conjugate Substrate Inhibitor antigen Chỳ thớch: Khá ng thể Khá ng nguyên Khá ng thể gắn enzyme Cơ chất
Hỡnh 10. Sơ đồ các phản ứng ELISA
Số hoỏ bởi Trung tõm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn
26
a. ELISA trực tiếp (direct ELISA)
Phƣơng pháp này ớt đƣợc sử dụng trong ELISA định lƣợng mà thƣờng đƣợc sử dụng cho ELISA định tớnh. Yếu tố cần chẩn đoán (vớ dụ nhƣ kháng nguyờn) đƣợc cố định trực tiếp lờn một bề mặt rắn và sau đú đƣợc xác định sự hiện diện bằng yếu tố phát hiện.
Phƣơng pháp này cú ƣu điểm là chỉ cần một lần ủ do đú tiết kiệm thời gian và tối thiểu đƣợc việc kiểm soát các điều kiện trong quá trỡnh thực hiện (thay đổi nhiệt độ và buffer cho mỗi lần ủ, tớnh thời gian…). Tuy nhiờn, nhƣợc điểm của nú là nhuộm màu nền (background staining) cao do sự liờn kết khụng đặc hiệu của kháng thể với bề mặt rắn và các protein cố định trờn bề mặt rắn. Việc đánh dấu từng loại kháng thể sử dụng cho mỗi kháng nguyờn cũng khá tốn kộm, nhất là khi phải chẩn đoán một số lƣợng lớn các loại kháng nguyờn khác nhau. Ngoài ra, phƣơng pháp này cũng cú giới hạn phát hiện cao và cần một lƣợng lớn các yếu tố cần chẩn đoán do sự liờn kết kộm hiệu quả của yếu tố này lờn bề mặt rắn cũng nhƣ sự cạnh tranh của các protein khác trong quá trỡnh phản ứng miễn dịch.