Phƣơng pháp ELISA gián tiếp tƣơng tự nhƣ ELISA trực tiếp, nhƣng ở đõy ngƣời ta sử dụng tới hai lớp yếu tố phát hiện, và chỉ cú lớp yếu tố phát hiện cuối cựng mới mang enzyme.
Sơ đồ phƣơng pháp gồm những bƣớc nhƣ sau:
Số hoỏ bởi Trung tõm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 27 Khá ng thể Khá ng nguyê n Chú thích: Khá ng thể gắn enzyme Cơ chất Khá ng nguyê n Khá ng thể Khá ng thể gắn enzyme Bổ sung cơ chất Dừng phản ứng
Hỡnh 11. Sơ đồ phản ứng ELISA gián tiếp
Phƣơng pháp này là chỉ cần tạo một loại kháng kháng thể mang enzyme để nhận biết cho nhiều kháng nguyờn khác nhau. Kháng thể sơ cấp cũng là những protein và cũng mang những epitope của riờng nú. Nếu nhiều loại kháng thể khác nhau đƣợc sản xuất từ cựng một loài sinh vật, tất cả các loại kháng thể này đều mang những epitope chung đặc trƣng cho loài đú. Việc sản xuất một kháng kháng thể cú khả năng liờn kết với epitope đú là hoàn toàn cú thể, thụng qua việc tiờm các kháng thể trờn vào một loài sinh vật khác. Phƣơng pháp này cũng cho giới hạn phát hiện thấp hơn khoảng 10 lần so với ELISA trực tiếp, do khả năng liờn kết nhiều kháng kháng thể lờn một phõn tử kháng thể sơ cấp, làm tăng số lƣợng enzyme đƣợc cố định. Tuy nhiờn nhƣợc điểm của nú là tăng số bƣớc thực hiện do đú làm tăng việc kiểm soát các điều kiện quá trỡnh và kộo dài thời gian chẩn đoán. Nhằm tăng khả năng phát hiện, ngƣời ta cú thể sử dụng kỹ thuật nối cầu (brigde) bổ trợ cho ELISA gián tiếp. Về nguyờn tắc, kỹ thuật brigde cũng tƣơng tự nhƣ ELISA gián tiếp, nhƣng ở đõy sử dụng nhiều lớp yếu tố phát hiện hơn (trờn hai lớp). Qua mỗi lớp yếu tố phát hiện, tớn hiệu lại đƣợc khuếch đại lờn vài lần. Tuy nhiờn cần lƣu ý là càng nhiều lớp yếu tố phát hiện, số bƣớc thực hiện càng nhiều và sẽ kộo dài thời gian, tăng thờm việc kiểm soát điều kiện cho từng quá trỡnh, cũng nhƣ tăng khả năng liờn kết chộo giữa các yếu tố phát hiện với nhau.
Số hoỏ bởi Trung tõm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn
28