3.3.2. Kết quả xác định sự liên kết của phức hợp aptamer - hạt nano vàng với E. coli O157:H7 với E. coli O157:H7
Vi khuẩn E. coli O157:H7 đƣợc nuôi trong môi trƣờng LB lỏng đạt OD600 = 1. Tiến hành thu tế bào vi khuẩn, rửa bằng dung dịch PBS, sau đó hoà lại trong 1ml PBS. Dùng 100µl dung dịch vi khuẩn ủ với 100µl phức hợp aptamer - hạt vàng, ủ lắc ở nhiệt độ phòng 60 phút, sau đó ly tâm thu tế bào ở tốc độ 3000v/p trong 5 phút, rửa 3 lần với PBS và cuối cùng hòa lại trong 100µl PBS, dung dịch thu đƣợc đƣợc mang xử lý và chụp ảnh TEM. Kết quả thu đƣợc trên hình 3.14 cho thấy phức hợp aptamer - hạt nano vàng bám đặc hiệu trên bề mặt vi khuẩn E. coli O157:H7.
Nhƣ vậy, kết quả chụp ảnh dƣới kính hiển vi điện tử (hình 3.14) đã một lần nữa khẳng định kết quả gắn các hạt nano vàng (đƣờng kích 30nm - 40 nm) với aptamer bám đặc hiệu E. coli O157:H7. Còn đối với E. coli thƣờng, phức hệ không liên kết.Các chấm đen là các hạt vàng; các sợi mảnh dài là lông roi của vi khuẩn E. coli O157:H7.
Trên hình có một vài phức hợp aptamer – hạt nano vàng liên kết E. coli
thƣờng, có thể đó là do quá trình ủ màng trong quá trình sàng lọc chƣa khóa hết các vị trí có thể liên kết với E. coli thƣờng.
a b
Hình 3.14:Ảnh chụp TEM sự liên kết của phức hệ aptamer-hạt nano vàng với E. coli O157:H7 và E. coli thƣờng
a, Ảnh chụp TEM sự liên kết của phức hệ aptamer-hạt nano vàng với E. coli
O157:H7
b, Ảnh chụp TEM sự liên kết của phức hệ aptamer-hạt nano vàng với E. coli thường