codA bằng ppt
Phosphinothricin 250mg/l bổ sung tween 20, dùng tăm bông thấm thuốc thử phết trực tiếp lên bề mặt của lá của cây đậu tương đã biến nạp. Thu kết quả sau 3 -5 ngày.
Hình 3.12 Kết quả kiểm tra các dòng Đậu Tương T0 bằng Phosphinothricin
A: Cây T0 dương tính Phosphinothricin 250mg/l B: Cây T0 âm tính Phosphinothricin 250mg/l C: Cây đối chứng
Hình 3.13 Kết quả kiểm tra các dòng đậu tương T1 bằng Phosphinothricin
A: Cây T1gieo sau 20 ngày
B1: Lá cây T1 dương tính Phosphinothricin 250mg/l
B2: Lá cây T1 có khả năng tự phục hồi với Phosphinothricin 250mg/l
B3: Lá cây T1 âm tính Phosphinothricin 250mg/l.
Từ 23 dòng đậu tương T0 thử trực tiếp với Phosphinothricin 250mg/l tại bề mặt lá. Sau 3 ngày phết thuốc diệt cỏ tại vị trí dùng thuốc thử ở 13 cây lá co lại và mất dần sắc tố xanh lục cả lá mà chuyển sang màu xanh vàng đến 5 ngày thì tại vị trí thử chuyển sang màu vàng, cháy khô. 10 cây còn lại tại vị trí thử lá vẫn nguyên hiện trạng ban đầu hoặc lá hơi co lại nhưng không bị mất màu xanh lục của lá. Như vậy kết quả kiểm tra các dòng T0, thu được 10 dòng dương tính với Phosphinothricin 250mg/l.
Sau khi thu hoạch hạt của các dòng T0 tiến hành gieo để đánh giá các dòng T1. Các cây T1 sau khi nảy mầm 22-25 ngày ta dùng Phosphinothricin 250mg/l bổ sung Tween 20 để kiểm tra khả năng kháng thuốc của các cây T1.
Bảng 3.6 Kết quả kiểm tra các dòng T1 bằng Phosphinothricin 250mg/l
-: Kết quả âm tính; +: Kết quả dương tính; ?: Kết quả có khả năng phục hồi với ppt
Số dòng cây Đậu tương T1 (Giống đậu tương DT22)
T0 T1
STT Tên dòng PCR ppt Tên dòng ppt PCR
1 rd29A codA 1 - + + rd29A codA 1.1 - - - - rd29A codA 1.2 - - - - 2 rd29A codA 2 + + + + rd29A codA 2.1 - - - - 3 rd29A codA 3 + - + + rd29A codA 3 + + + + 4 rd29A codA 4 + + + rd29A codA 4.1 - - - - rd29A codA 4.2 + + + + 5 rd29A codA 5 + + + rd29A codA 5.1 - + - - rd29A codA 5.2 + - ? - rd29A codA 5.3 - - - - 6 rd29A codA 6 + + + + rd29A codA 6.1 - - - - rd29A codA 6.2 - - - - rd29A codA 6.3 - - - - 7 rd29A codA 7 + + + + rd29A codA 7.1 - - - - rd29A codA 7.2 - - - - 8 rd29A codA 8 + + + + rd29A codA 8.1 - - - - rd29A codA 8.2 - - - - 9 rd29A codA 9 + + + + rd29A codA 9 + + + + 10 rd29A codA 10 + + + rd29A codA 10.1 - - + + rd29A codA 10.2 - - - - Kết quả sau 5 ngày kiểm tra thu được 3 dòng dương tính hoàn toàn với thuốc thử và 3 dòng có hiện tượng bị ảnh hưởng nhẹ và hồi phục lại trạng thái ban đầu tại vị trí thử, còn lại 13 dòng thì âm tính hoàn toàn với thuốc thử theo Hình 3.13.