- Nội dung 5: Thử nghiệm hiệu quả phòng trừ bệnh thối nhũn củ khoai tây của các chủng vi khuẩn nội sinh có hoạt tính enzyme AHL
Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập vi khuẩn nội sinh từ cây cà dạ
3.1 Phân lập vi khuẩn nội sinh từ cây cà dại
Cây cà dại (Solanum sp.) cùng thuộc họ cà với khoai tây, và rất phổ biến tại Việt Nam. Những nghiên cứu trước đây của chúng tôi cho thấy Cà dại là một nguồn cung cấp vi khuẩn nội sinh đầy tiềm năng. Rất nhiều chủng VKNS phân lập được có khả năng đối kháng với nhiều loài vi khuẩn gây bệnh nghiêm trọng trên cây trồng như: Ralstonia solanacesrum, Xanthomonas
oryzae pv.oryzae, E.carotovora subsp. carotovora... Vì vậy, trong nghiên cứu
này tôi lựa chọn cây cà dại là nguồn phân lập các chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs.
Từ 6 mẫu cây cà dại sạch bệnh được thu thập từ Yên Bái, chúng tôi đã phân lập được 70 chủng vi khuẩn nội sinh. Các chủng vi khuẩn phân lập được có hình thái và màu sắc khuẩn lạc đa dạng (Phụ lục 1.1).
Hình 3.1: Hình thái khuẩn lạc của một số chủng VKNS trên môi trường YPDA sau 24h nuôi cấy
Các chủng VKNS này được thu mẫu ở các lần khác nhau và được cấy truyền các khuẩn lạc tách rời nhau khi phát triển trên môi trường YPDA. Sau 3 lần cấy truyền liên tiếp từ một khuẩn lạc thu được chủng vi khuẩn thuần. Bảo quản các chủng VKNS phân lập được trong sữa tách béo 10% ở nhiệt độ -20oC để tiến hành các thí nghiệm về khả năng phân hủy AHLs tiếp theo.
Kết quả nghiên cứu này cũng tương tự như nghiên cứu của Long và cs (2003), trong nghiên cứu đó tác giả cũng đã phân lập được 73 chủng VKNS từ rễ cây Cà dại. Trong số 73 chủng phân lập được có 40 chủng thể hiện hoạt tính đối kháng in vitro đối với một số loài vi khuẩn gây bệnh thực vật khác nhau.
3.2 Khả năng phân hủy AHLs của vi khuẩn nội sinh
Nuôi cấy vạch song song các chủng VKNS, vi khuẩn gây bệnh Ecc và chủng vi khuẩn chỉ thị (reporter strains) Chromobacterium violaceum CV026
để xác định khả năng phân hủy AHLs của các chủng VKNS. Quan sát phản ứng màu khuẩn lạc của chủng chỉ thị Chromobacterium violaceum CV026 khi nuôi cấy vạch song song với VKNS và vi khuẩn gây bệnh trên đĩa thạch, xác định đặc tính của các chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs (do chủng vi khuẩn Ecc tiết ra) bằng cách quan sát màu sắc tại vạch cấy chủng chỉ thị. Chủng chỉ thị CV026 sản sinh violacein có khả năng cảm ứng với AHLs sẽ chuyển màu tím nên mẫu nào chuyển màu sẽ không có khả năng phân hủy AHLs và ngược lại chủng chỉ thị không chuyển màu là do chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs do vi khuẩn gây bệnh Ecc sản sinh. Trường hợp các chủng chỉ thị chuyển màu nhạt là do khả năng phân hủy AHLs yếu của VKNS.
Như vậy, từ 70 chủng VKNS được phân lập từ cây cà dại, sau khi tiến hành tuyển chọn khả năng phân hủy AHLs bằng phương pháp nuôi cấy vạch song song, đã xác định được 9 chủng có khả năng phân hủy AHLs (Bảng 3.1).
Trong số đó:
6 chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs mạnh. 3 chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs yếu hơn.
Bảng 3.1:Các chủng VKNS có khả năng phân hủy AHLs
TT Chủng Nguồn gốc Khả năng phân hủy AHLs
1 BGCR1-4 Rễ cà dại + 2 DR3 Rễ cà dại ± 3 SSR8-1 Rễ cà dại + 4 BGCSL1-2 Thân cà dại + 5 H5 Lá cà dại + 6 BGCR2-3 Rễ cà dại + 7 30-2 Lá cà dại ± 8 DSR10 Thân cà dại + 9 DSL6 Thân cà dại ±
Hình 3.2: Khả năng phân hủy AHLs của các chủng VKNS (Trong đó: C: CV026; E: Ecc; V1, V2 : chủng VKNS BGCSL1-2 và BGCR1-4 ; Âm tính (-): Vạch cấy C chuyển màu tím sẫm; Phân hủy yếu (±): Vạch cấy C có màu tím nhạt; Phân hủy mạnh (+): Vạch cấy