PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Vật liệu nghiên cứu2.1.1. Vật liệu thực vật 2.1.1. Vật liệu thực vật
- Mẫu cây cà dại không bị bệnh - Mẫu củ khoai tây sạch bệnh
2.1.2. Các chủng vi khuẩn
- Chủng vi khuẩn sản sinh AHLs gây bệnh thối nhũn khoai tây E.
catovora subsp. carotovora (Ecc)
- Chủng vi khuẩn chỉ thị C. violaceum CV026, VIR07.
2.1.3. Hóa chất
Các loại hóa chất thông dụng để sử dụng trong quá trình nghiên cứu như: Yeast extract, Peptone, Dextro, L-glutamic acid, Tryptone, NaCl được mua từ các hãng Merck, Sigma, Bio basic...
Hóa chất chuyên dụng: 3 loại AHLs tổng hợp: N-hexanoyl-L- homoserine lactone (C6-HSL); N-(3-Oxooctanoyl)-L-homoserine lactone (C8-HSL); N-decanoy-L-Homoserine lactone (C10-HSL)
2.1.4. Môi trường sử dụng trong nghiên cứu
2.1.4.1. Môi trường phân lập và nuôi cấy vi khuẩn
Thành phần môi trường YPDA (g/l): cao nấm men 1.5, dextrose 1.5, peptone 0.3, agar 20, nước cất, pH 7.2, khử trùng 121ºC trong 15 phút.
2.1.4.2. Môi trường bảo quản vi khuẩn
Thành phần môi trường sữa tách béo (%): skim milk 10, L-glutamic acid 0.05, glycerol 10, nước cất, khử trùng 121ºC trong 15 phút.
2.1.4.3. Môi trường thử khả năng sản sinh và phân hủy AHLs
agar 20, nước cất, pH 7, khử trùng 121ºC trong 15 phút.
2.1.4.4. Cách pha một số hóa chất dùng trong thí nghiệm
Dung dịch NaClO3% (Pha 500ml): lấy 272ml NaClO + thêm 228ml H2O cất, sau đó cho 3 giọt Tween vào và lắc đều.
2.1.4.5 Môi trường TSB
Môi trường TSB thành phần (g/l): Tryptone 17, Soytone 3, Sodium Chloride 5, Dipotassium phosphate 25, Dextrose 2.5, Agar 15, nước cất, pH 7.3, khử trùng 1210C trong 15 phút.
2.1.4.6 Môi trường KB
Môi trường KB thành phần (g/l): Peptone 4, K2HPO4 0.3, MgSO4.7H2O 0.3, Glycerol 3, nước cất, pH 7.5, khử trùng 1210C trong 15 phút
2.1.5. Các thiết bị máy móc
Quá trình thực hiện đề tài sử dụng Pipetman, tủ cấy an toàn sinh học Nuaire (Mỹ), máy ly tâm (Ependorf), máy đo pH Horiba (Nhật Bản), nồi khử trùng Omron (Nhật Bản), Cân điện tử (Anh), máy vortex, tủ lạnh bảo quản mẫu Vestrost (Đan Mạch), tủ nuôi cây Jeiotech (Hàn Quốc), tủ sấy Lenton (Anh), máy khuấy từ Fisher (Mỹ) … của Bộ môn Bệnh học Phân tử - Viện Di truyền Nông nghiệp.
2.1.6. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Luận văn được thực hiện tại Bộ môn Bệnh học Phân tử - Viện Di truyền Nông nghiệp từ tháng 1 đến tháng 12 năm 2015
2.2. Nội dung nghiên cứu