- Nội dung 5: Thử nghiệm hiệu quả phòng trừ bệnh thối nhũn củ khoai tây của các chủng vi khuẩn nội sinh có hoạt tính enzyme AHL
2.3.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn nội sinh từ cây cà dạ
2.3.1.1 Thu thập mẫu
Các mẫu thân, lá, rễ cà dại không có triệu chứng bệnh được thu thập trên các cánh đồng tại tỉnh Yên Bái.
Các mẫu thu thập được để riêng biệt trong túi báo, bảo quản ở nhiệt độ 15-20oC cho đến khi phân lập vi khuẩn.
2.3.1.2 Phương pháp phân lập vi khuẩn nội sinh
Phân lập VKNS được tiến hành theo phương pháp của Furuya và cs, (2002) với một số thay đổi như sau:
Từ những mẫu thu được ngoài tự nhiên được đưa về rửa sạch dưới vòi nước để chuẩn bị các bước tiếp theo. Ngâm mẫu trong cồn 70% trong 3 phút tiếp đến ngâm mẫu trong dung dịch NaClO 3% trong 5 phút. Sau đó rửa 3 lần với nước cất đã khử trùng. Nghiền mẫu trong đĩa petri đã khử trùng. Nhỏ 1ml nước cất đã khử trùng vào dịch nghiền và trộn đều tạo thành dung dịch gốc. Chuẩn bị 6 ống eppendorf 1.5ml, mỗi ống chứa 900μl nước cất khử trùng. Hút 100μl dịch gốc nhỏ vào ống 1 trộn đều, tiếp tục hút 100μl dịch từ ống 1 nhỏ sang ống 2 và làm lần lượt theo thứ tự cho đến ống thứ 6 để được các nồng độ pha loãng liên tiếp. Lấy 100μl từ các ống với 6 nồng độ đã được pha loãng
nhỏ lần lượt vào từng đĩa môi trường YPDA và trang đều trên bề mặt đĩa. Để mẫu trong tủ 280C, sau 24h kiểm tra khuẩn lạc. Mô tả đặc điểm của các khuẩn lạc trên đĩa, sau đó cấy chuyển vào môi trường YPDA mới. Bảo quản các chủng VKNS phân lập được trong dung dịch sữa tách béo 10% có bổ sung glycerol ở - 200C để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.