Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.3. Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng iba và nano bạc đến quá trình
BẠC ĐẾN Q TRÌNH TẠO MƠ SẸO (CALLUS) HOA HỒNG PHÁP
4.3.1. Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng IBA đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp sẹo hoa hồng Pháp
Thí nghiệm nhằm đánh giá ảnh hưởng của IBA đến q trình tạo mơ sẹo
từ lá in vitro hoa hồng Pháp. Chúng tôi tiến hành bố trí thí nghiệm với 5 cơng
thức (CT) tương ứng với 5 nồng độ IBA khác nhau tương ứng (0; 0,1; 0,3; 0,5; 0,7 mg/l) bổ sung vào mơi trường trong đó cơng thức đối chứng là 0 mg/l. Sau 6 tuần theo dõi chúng tôi thu được kết quả ở bảng 4.5 sau.
Bảng 4.5. Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng IBA đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau 6 tuần)
Công
thức IBA (mg/l) Tỷ lệ tạo mô sẹo (%) Đặc điểm mô sẹo
CT1 0 33,00±0,46e Mô sẹo phát triển chưa hết bề mặt lá, chắc, có màu nâu
CT2 0,1 41,33±0,49c Mô sẹo phát triển chưa hết bề mặt lá, xốp, có màu trắng
CT3 0,3 56,67±0,50b Mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, có màu trắng
CT4 0,5 66,67±0,48a Mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, có màu trắng
CT5 0,7 36,67±0,49d Mô sẹo phát triển chưa hết bề mặt lá chắc, có màu nâu
LSD0,05 3,1
CV% 3,6
Ghi chú: So sánh các giá trị trong cùng một cột, các giá trị công thức mang cùng một chữ cái thì khác nhau khơng có ý nghĩa, các giá trị cơng thức mang khác chữ thì khác có ý nghĩa ở mức α = 0, 05.
Số liệu thống kê từ bảng 4.5 cho thấy, sau 6 tuần theo dõi với 3 lần lặp lại, tỉ lệ tạo callus từ lá in vitro ở CT4 đạt cao nhất 66,67%, khác biệt 5% so với các cơng thức cịn lại, ở công thức này, mô sẹo đã phát triển hết bề mặt lá, xốp, có màu trắng, phồng to. Tiếp đến là CT3 (0,3mg/l) cho tỷ lệ tạo mô sẹo 56,67%, mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, trắng. Thấp nhất ở CT1 đối chứng (0mg/l) tỷ lệ tạo mô sẹo 33,0%, trên bề mặt lá chỉ xuất hiện những sùi nhỏ, có màu nâu. Ở CT5 (0,7mg/l) cho tỷ lệ tạo mô sẹo thấp 36,67%, mô sẹo chưa phát triển hết bề mặt lá, có màu nâu, trong khi đó ở CT2 (0,1mg/l) có tỷ lệ tạo mơ sẹo 41,33%, mơ sẹo chưa phát triển hết bề mặt lá nhưng lại xốp, trắng. Từ kết quả cho thấy ở nồng độ IBA cao đã gây ức chế q trình tạo mơ sẹo từ lá in vitro. Sở dĩ có số liệu như vậy, theo chúng tôi nồng độ IBA cao sẽ ức chế q trình phát sinh mơ sẹo, do đó ở nồng độ cao tỷ lệ mơ sạo thấp. Với nghiên cứu của Rashida Soomro et al. (2003) đã sử dụng IBA cũng được cho là kích thích tạo mơ sẹo ở mẫu mơ
hoa hồng Rosa Indica, trong khi đó Jala, A. (2014) cũng cho rằng 2,4 D có khả
năng tạo mơ sẹo cho giống hoa hồng nghiên cứu, nhưng với mẫu hồng Pháp, 2,4 D lại chưa thể hiện sự tạo thành mơ sẹo.
Có thể thấy được nồng độ IBA ảnh hưởng đáng kể đến sự phát sinh mô sẹo từ lá in vitro hoa hồng Pháp. Khi tăng nồng độ IBA kéo theo tỷ lệ tạo mô sẹo cũng tăng theo nhưng khi nồng độ quá cao gây sự ức chế q trình tạo mơ sẹo từ lá in vitro. Nồng độ IBA thích hợp nhất bổ sung vào mơi trường tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp là 0,5 mg/l. CT1 0mg/l IBA CT2 0,1mg/l IBA CT3 0,3mg/l IBA CT4 0,5mg/l IBA CT5 0,7mg/l IBA
Hình 4.3. Ảnh hưởng của chất điều tiết sinh trưởng IBA đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau 6 tuần)
4.3.2. Ảnh hưởng của nano bạc lên q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp Để đánh giá ảnh hưởng của nồng độ nano đến q trình tạo mơ sẹo từ lá in vitro hoa hồng Pháp. Từ thí nghiệm 4.3.2, chúng tơi lựa chọn nồng độ 0,5 mg/l
IBA bổ sung vào môi trường kết hợp với nồng độ nano khác nhau (0, 2, 4, 6, 8 ppm) tương ứng với 5 cơng thức (1, 2, 3, 4, 5) trong đó cơng thức đối chứng là cơng thức 1 (CT1). Thí nghiệm được theo dõi sau 6 tuần và thu được kết quả ở bảng 4.6 sau.
Bảng 4.6. Ảnh hưởng của nano bạc lên q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp (sau 6 tuần) Công thức NS (ppm) Tỷ lệ
tạo mô sẹo (%) Đặc điểm mô sẹo CT1 0 66,7±0,36c
Mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, màu trắng CT2 2 76,7±0,43b
Mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, màu trắng CT3 4 86,7±0,34a
Mô sẹo phát triển hết bề mặt lá, xốp, màu trắng CT4 6 53,3±0,50d
Mô sẹo phát triển chưa hết bề mặt lá, chắc, màu nâu CT5 8 46,7±0,50d Mô sẹo phát triển chưa hết bề mặt lá, chắc, màu nâu
LSD0,05 8,7
CV% 4,1
So sánh các giá trị trong cùng một cột, các giá trị công thức mang cùng một chữ cái thì khác nhau khơng có ý nghĩa, các giá trị cơng thức mang khác chữ thì khác có ý nghĩa ở mức α = 0, 05.
Từ bảng số liệu cho thấy, nano có ảnh hưởng nhiều tới khả năng tạo mơ sẹo của mảnh lá in vitro giống hoa hồng Pháp. Ở CT3(4 ppm) cho tỉ lệ tạo callus cao nhất 82,9% khác biệt có ý nghĩa thống kê 5% so với các công thức khác, ở công thức này, mô sẹo phát triển rộng, xốp, trắng, sau đó đến CT2 (2 ppm) tỷ lệ tạo callus cũng cao 76,7%. Ở CT1 (CT đối chứng) (0 ppm) có tỷ lệ tạo mơ sẹo là 66,7% thấp hơn ở CT2 và CT3 nhưng cao hơn CT4 (6 ppm), CT5 (8 ppm). Ở CT4 và CT5 tỷ lệ tạo mô sẹo giảm dần và thấp nhất ở CT5, ở 2 công thức này mô sẹo chưa phát triển hết bề mặt lá, chỉ có những điểm sùi nhỏ có màu nâu. Một nghiên cứu của Emad A. Ewais et al. (2015) đã tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của các hạt nano bạc biosynthesized (BạcNPs) vào tăng trưởng, giải phẫu học, và protein và DNA của Solanumnigrum. Môi trường MS + 3.0 mg/l α-NAA + 5.0
mg/l BA bổ sung thêm nano bạc với các nồng đô 0, 2, 4, 8 mg/l. Kết quả cho
thấy sau 10 ngày ở môi trường không bổ sung nano bạc đã xuất hiện mô sẹo nhỏ màu trắng, xanh trong khi đó sau 10-13 ngày trên các mơi trường có bổ sung
nano bạc đã xuất hiện mô sẹo lớn hơn, xốp có màu trắng, xanh hoặc vàng. Ở mơi trường bổ sung 8mg/l nano bạc mơ sẹo xốp có màu trắng xanh. Kết quả trên cho
thấy nano có ảnh hưởng lớn đến khả năng tạo mô sẹo từ lá in vitro, khi bổ sung
nồng độ nano thích hợp sẽ làm tăng tỷ lệ tạo mô sẹo, nhưng khi nồng độ nano quá cao sẽ gây ức chế khả năng tạo mơ sẹo. Sở dĩ có kết quả như vậy, theo chúng tơi nano bạc có ảnh hưởng đến q trình phát sinh mơ sẹo, nhưng ở nồng độ cao nano bạc ức chế quá trình phát sinh mô sẹo nên ở CT5 tỷ lệ tạo mô sẹo chỉ là 46,7% thấp hơn công thức đối chứng. Vậy nồng độ nao bạc thích hợp nhất bổ sung vào mơi trường tạo mơ sẹo là 4ppm.
Tóm lại, ở mơi trường bổ sung 0,5 mg/l IBA và 4 ppm nano bạc là mơi trường thích hợp nhất cho khả năng tạo mô sẹo từ lá in vitro của hoa hồng Pháp.
CT1 0ppm NS CT2 2ppm NS CT3 4ppm NS CT4 6ppm NS CT5 8ppm NS Hình 4.4. Ảnh hưởng của nano bạc đến q trình tạo mơ sẹo hoa hồng Pháp
(sau 6 tuần)
4.4. ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG BA VÀ NANO BẠC ĐẾN QUÁ TRÌNH NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO HOA