Sơ đồ các bước thực hiện
Phương pháp thu mẫu cá chép bị bệnh do trùng bào tử sợi kí sinh ở ruột:
Đối với mẫu cá chết: Với những mẫu không thể vận chuyển nguyên con về phòng thí nghiệm, tiến hành thu mẫu bào nang ngay tại ao. Cá được mổ theo 3 đường cơ bản để bộc lộ xoang bụng, sau đó tiến hành lấy bào nang trong ruột. Bào nang được lưu giữ trong chai nhựa có thể tích 500ml và để trong ngăn mát tủ lạnh bảo quản. Nếu có đủ điều kiện, mẫu cá chết sẽ được bảo quản lạnh trong
Nghiên cứu TBTS trên cá chép
Thu mẫu
Thu mẫu làm tiêu bản xác định kích thước và hình thái
Thu mẫu làm tiêu bản mô bệnh học
Đo kích thước của 30 bào tử Quan sát tổn thương do bào nang TBTS ở mang cá
thùng xốp, vận chuyển về phòng thí nghiệm bộ môn Môi trường - Bệnh thủy sản, sau đó mới tiến hành giải phẫu để thu mẫu bào nang.
Đối với mẫu cá sống: Với mẫu cá sống, tiến hành đóng cá vào túi nilong và bơm oxy, cần vận chuyển nhanh chóng về phòng thí nghiệm để tiến hành giải phẫu thu mẫu bào nang. Nếu khi vận chuyển về phòng thí nghiệm, cá vẫn còn sống thì có thể thả vào bể nhằm lưu giữ mẫu sống để sử dụng lâu dài hơn.
Số bào nang thu được, sau khi làm thí nghiệm một phần, phần còn lại sẽ được lưu giữ trong ống falcon và bảo quản ở ngăn mát hoặc ngăn đá tủ lạnh.
Phương pháp thu mẫu cá chép bị bệnh do trùng bào tử sợi kí sinh ở mang
Đối với cá chết: tiến hành thu cả con và bảo quản trong ống falcon chứa cồn Etanol 90o, sau đó vận chuyển về phòng thí nghiệm để giải phẫu lấy bào nang ở mang.
Đối với mẫu cá sống: tiến hành đóng túi nilong với mật độ thưa và vận chuyển ngay về phòng thí nghiệm để giải phẫu lấy bào nang.
Số cá thu được sẽ được sử dụng một phần, số cá còn lại sẽ được cho vào ống falcon và bảo quản trong ngăn mát tủ lạnh để giữ mẫu.
Phương pháp làm tiêu bản
Bước 1: Bào nang được nghiền bằng cối chày sứ, sau đó sẽ được pha loãng với nước.
Bước 2: Dùng micropipet (1000µl), hút lấy dung dịch vừa pha loãng ở bước 1 và nhỏ lên lam kính. Chú ý trước khi hút nên đảo đều dung dịch.
Bước 3: Cố định mẫu trên ngọn lửa đèn cồn. Hơ lam kính trên ngọn lửa đèn cồn đến khi dung dịch vừa nhỏ trên lam kính bay hơi hết. Chú ý không để lam kính quá gần ngọn lửa sẽ làm vỡ lam kính.
Bước 4: Nhuộm mẫu. Sử dụng bộ thuốc nhuộm Gram, có thể sử dụng thuốc nhuộm số 1 (Crystal violet) hoặc thuốc nhuộm số 4 (Fucsin). Hoặc nhuộm mẫu với 3 thuốc nhuộm 1,2,3.