- Lần 1 (nghiên cứu cắt ngang): Lấy mẫu huyết thanh của trâu bò tại các hộ chăn nuôi. Sau đó tiến hành xét nghiệm bằng phương pháp 3 ABC ELISA.
Mẫu huyết thanh: Lấy từ 4ml – 6ml máu để có thể có được 2ml huyết thanh. Sau khi lấy được máu, kéo nhẹ pittong lui về phía sau để tạo khoảng trống rồi nghiêng một góc 150 – 250 so với mắt đất và để yên trong khoảng 30 phút để cho máu đong lại trước khi di chuyển. Tách lấy huyết thanh, bảo quản mẫu huyết thanh ở 4 - 80C cho đến khi vận chuyển về phòng thí nghiệm.
- Lần 2 (nghiên cứu bệnh - chứng): Sau khi có kết quả xét nghiệm mẫu huyết thanh, lấy mẫu probang của tất cả trâu bò cho kết quả dương tính huyết
thanh học với virus LMLM bằng phương pháp 3 ABC ELISA.
Mẫu probang: Để thu thập được những mẫu probang (dịch từ hầu – họng /niêm mạc được cạo ra) thì có thể được thực hiện theo những bước sau đây:
•Sử dụng chuồng ép để cố định gia súc. Việc cố định gia súc là cần thiết
•Đưa dụng cụ lấy mẫu probang xuyên qua miệng và ở phía trên lưỡi sau đó đến hầu họng / thực quản với một lực nhẹ nhàng.
•Đưa dụng cụ vào khoảng 70 – 90% độ sâu của dụng cụ lấy mẫu probang
•Di chuyển dụng cụ với động tác nhẹ nhàng và nhanh, cạo các biểu mô thực quản, vòm miệng mềm, và thành của hầu - họng. Các vùng quan trọng nhất để thu thập mẫu là chỉ sâu hơn các sụn thanh quản.
•Nhẹ nhàng kéo dụng cụ lấy mẫu ra ngoài kèm với cốc với lực kéo ổn định. Việc này là rất quan trọng để di chuyển dụng cụ lấy mẫu probang ra ngoài nhằm tránh làm hại các mô phía trong của gia súc, chỉ cần dùng với một lực liên tục nhẹ nhàng. Tránh làm đổ dung dịch mẫu thu thập được chứa trong cốc.
•Nếu mẫu được xem là phù hợp (mẫu không chứa thức ăn), đổ dung dịch thu được từ cốc vào ống thu thập mẫu.
•Sau khi lấy, lưu giữ mẫu và vận chuyển về phòng thí nghiệm trong vòng 24 giờ. Trong trường hợp không vận chuyển được về phòng thí nghiệm thì mẫu phải được bảo quản trong bình nitơ lỏng.
•Sát trùng dụng cụ lấy mẫu probang với thuốc sát trùng đã được chuẩn bị trước đó.
•Rửa sạch dụng cụ lấy mẫu probang sau khi đã được ngâm với thuốc sát trùng với nước để chuẩn bị lấy mẫu cho gia súc khác.
Trường hợp mẫu được lấy có chứa một vài giọt máu, thì mẫu này có thể sử dụng, tuy nhiên người thực hiện lấy mẫu nên thực hiện nhẹ nhàng hơn hoặc cân nhắc để lựa chọn 1 dụng cụ khác với đường kính của cốc nhỏ hơn. Nếu trong mẫu được lấy có chứa thức ăn được gia súc nôn ra từ dạ cỏ, (1) giữ lại mẫu này, (2) cho gia súc nghỉ ngơi trong 5 phút, và (3) thực hiện lấy mẫu lại với dụng cụ lấy mẫu probang có đường kính của cốc nhỏ hơn. Nhưng lần lấy mẫu thứ 02 mà mẫu được lấy vẫn chứa thức ăn, vẫn giữ lại mẫu, tuy nhiên cố gắng loại bỏ thức ăn từ các mẫu trên và gộp chung những mẫu dịch nhầy đã thu thập được vào trong cùng 1 ống.
Bảng 3.1. Công thức pha môi trường bảo quản mẫu Probang
Hóa chất Số lượng
MEM bột 37,6 gram
HEFES (Gibco15630) 37,5 gram
Kháng sinh 5 ml/1,5 lít
L glutamine 20 ml/2 lít
NaHCO3 35ml/2 lít
(Áp dụng cho thể tích dung dịch môi trường 04 lít)
Hình 3.1. Lấy mẫu probang