M Ở ĐẦU
3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN
2.3.1. Phương pháp điều tra và chọn mẫu nghiên cứu
Số liệu về tình hình tiêm phòng được thu thập bằng phương pháp điều tra hồi
cứu. Sử dụng phương pháp chọn mẫu hai giai đoạn áp dụng đối với xã an toàn dịch
bệnh động vật trên cạn, theo quy định tại phụ lục IV ban hành kèm theo Thông tư số
14/2016/TT-BNNPTNT ngày 02 tháng 6 năm 2016 của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn Quy định về vùng, cơ sở an toàn dịch bệnh động vật.
Số mẫu cần lấy được tính theo công thức sau (với tỷ lệ bảo hộ ước tính là 80%, sai số ước lượng đối với giá trị thực của quần thể là 10%, với quy mô đàn trên 2000 con):
n1 = Số mẫu huyết thanh cần lấy p = Tỷ lệ có kháng thể bảo hộ ước đoán
d = Sai số ước lượng so với giá trị thực ) 1 ( 96 . 1 2 2 ` p p d n1
Trường hợp quy mô đàn dưới 2000 con thì tính số mẫu theo công thức sau: n2: Số mẫu huyết thanh cần lấy
N: Tổng đàn
n1: Số mẫu huyết thanh cần lấy (nêu trên)
Thời gian tiêm vaccine: đợt 1 tháng 3 và tháng 4/2017, đợt 2 tháng 9 và tháng 10/2017.
Thiết kế biểu mẫu điều tra: biểu mẫu điều tra được thiết kế dùng để phỏng vấn
chủ gia súc nhằm thu thập thông tin về lứa tuổi, tính biệt, có bổ sung thức ăn tinh hay
không,... của từng con gia súc được lấy máu.
Mẫu máu được lấy vào các thời điểm sau tiêm vaccine LMLM type O 21, 28 và 70 ngày. Tổng số trâu bò lấy mẫu là 179 con.
Chọn các hộ chăn nuôi trâu bò để lấy mẫu: lập danh sách tất cả các hộ chăn nuôi
trâu bò của từng xã và lựa chọn ngẫu nhiên số hộ.
Vật liệu nghiên cứu: róng cố định gia súc, bông thấm, cồn iode, cồn 70o, bơm
kim tiêm nhựa, giá đỡ kim, kim lấy máu, giá và hộp đựng mẫu, ống nhựa Eppendorf
1,5 ml và 10 ml có nắp đậy, thùng bảo ôn, đá lạnh, ống Eppendoft, găng tay, khẩu
trang, dây cao su, bình giữ nhiệt.
Phương pháp lấy mẫu huyết thanh: cố định gia súc trong róng giá, sát trùng tĩnh
mạch cổ (cắt lông nếu lông rậm) hoặc động mạch đuôi (tại vị trí lấy máu). Sau đó đưa
mũi kim vào tĩnh mạch cổ hoặc động mạch đuôi, hút 3-5 ml máu, cho vào ống nghiệm 10 ml vô trùng đã chuẩn bị sẵn. Đặt ống máu nghiêng một góc 45o ở nhiệt độ phòng khoảng 1-2 giờđồng hồ để cố định cho máu đông. Ly tâm các ống máu ở tốc độ 1.500
vòng/phút trong 10 phút, sau đó chắt huyết thanh cho vào ống nhựa Eppendorf 2ml, có nắp, vô trùng đã chuẩn bị sẵn.
Bảo quản mẫu huyết thanh ở ngăn mát tủ lạnh. Trong trường hợp để lâu, bảo
quản huyết thanh ở nhiệt độ -20oC và tránh lấy huyết thanh ra khỏi tủ lạnh nhiều lần
do hiện tượng đông tan sẽ làm giảm hiệu giá kháng thể.