3. Ý nghĩa khoa học vă thực tiễn
1.4. TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT PCR ĐỂ CHẨN ĐOÂN BỆNH TÔM CHẾT SỚM
1.4.1. Khâi niệm vă nguyín lý hoạt động
PCR (Polymerase Chain Reaction) được dịch lă phản ứng chuỗi trùng hợp cũng có sâch gọi lă "phản ứng khuếch đại gen". PCR lă một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phđn tử nhằm khuếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mă không cần sử dụng câc sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử dụng trong câc nghiín cứu sinh học vă y học phục vụ nhiều mục đích khâc nhau, như phât hiện câc bệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoân những bệnh nhiễm trùng, tâch dòng gene, vă xâc định huyết thống.
Nguyín tắc phản ứng PCR (Polymerase Chain Reaction) được Kary Mullis vă ctv (Mỹ) phât minh năm 1985 vă kể từ đó đê tạo nín một tâc động to lớn đối với câc nhă nghiín cứu sinh học phđn tử vă kỹ thuật di truyền trín toăn thế giới (Richard Frothingham, 1996) [16].
Thông tin di truyền của mọi cơ thể sinh vật được chứa đựng trong phđn tử có tín lă DNA (acid deoxynucleic), đó lă một chuỗi xoắn kĩp gồm hai mạch đơn được tạo thănh từ bốn loại nucleotide gồm: A (adenine), C (cytosine), G (guanine) vă T (thymine). Câc nucleotide năy sắp xếp nối tiếp nhau theo một trình tự xâc định, vă trình tự năy không những đặc trưng ở từng loăi mă còn khâc nhau ở từng câc thể trong cùng một loăi. Giải trình tự DNA lă kỹ thuật giúp xâc định sự sắp xếp của bốn loại
nucleotide A, T, C, G trín phđn tử DNA, nhờ đó nghiín cứu được đặc điểm di truyền ở mức độ sinh học phđn tử (Tanil vă ctv, 1993) [23].
DNA lă cơ sở hoâ học của gen, phđn tử DNA lă 1 chuỗi xoắn kĩp của 2 mạch đơn được cấu tạo thănh từ 4 nucleotide, khâc nhau nhờ base của chúng đó lă A, C, G, T. Câc nucleotide năy nối liền nhau nhờ thứ tự xâc định, giải trình tự của gen chính lă phât hiện 4 loại nucleotide của gen sắp xếp thứ tự trín phđn tử DNA.
Phương phâp PCR dựa trín hoạt động của DNA polymerase trong quâ trình tổng hợp DNA mới từ mạch khuôn. Tất cả câc DNA polymerase đều cần những mồi lă những đoạn DNA ngắn có khả năng bắt cặp bổ sung với một đầu của mạch khuôn. Đoạn mồi năy sau đó sẽ được nối dăi ra nhờ hoạt động của DNA polymerase để hình thănh một mạch mới hoăn chỉnh. Một phản ứng PCR lă một chuỗi nhiều chu kỳ tiếp nối nhau, mỗi chu kỳ gồm ba bước, mỗi bước kĩo dăi khoảng văi chục giđy đến một phút (Richard Frothingham,1996; Johnson R, 2006) [16], [19].
Hình 1.6. Sơ đồ phản ứng PCR