L ỜI CAM Đ OAN
3.3. Kết quả nghiên cứu hướng dẫn xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm sinh họ c
phẩm sinh học
3.3.1 Kết quả nghiên cứu điều kiện sinh trưởng và phát triển của các chủng VSV phân giải xenlulo sử dụng trong sản xuất chế phẩm sinh học (môi trường, tốc độ lắc, thời gian, nhiệt độ, độ pH)
Xác định môi trường nuôi cấy
Thí nghiệm được thực hiện với 3 loại môi trường lỏng (PD; CMC; King B) với tốc độ lắc (150 vòng/phút), nhiệt độ ở 280C, thời gian lắc 72 giờ kết quảđược trình bày ở bảng 3.8
Bảng 3.8: Kết quả thí nghiệm ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến mật độ tế bào của VSV phân giải xenlulo
TT Chủng VSV PD Mật độ tế bào (cfu/ml) CMC King’B
1 CBK8 6,7.109 5,8.109 4,5.109
2 CBK11 6,3.109 5,5.109 4,1.109
3 CBK12 6,5.109 5,7.109 4,3.109
Bảng kết quả 3.8 cho thấy mật độ tế bào của cả 3 chủng VSV sinh màng nhầy trên môi trường PD đều cao hơn so với hai môi trường còn lại (CMC và King’B). Mật độ tế bào trên môi trường PD lỏng dao động từ 6,3.109-6,7.109 (cfu/ml); mật độ tế bào trên môi trường King’B dao động từ 4,1.109 – 4,5.109(cfu/ml) trong khi đó trên môi trường CMC lỏng mật độ đạt từ 5,5.109 - 5,8.109 (cfu/ml). Từ kết quả thí nghiệm này có thể thấy môi trường PD phù hợp để nhân sinh khối VSV phân giải xenlulo.
Xác định tốc độ lắc sinh khối phù hợp
Kết quả thí nghiệm về tốc độ lắc ảnh hưởng đến mật độ tế bào VSV của 3 chủng VSV phân giải xenlulo được trình bày ở bảng 3.9.
Bảng 3.9: Kết quả thí nghiệm ảnh hưởng của tốc độ lắc đến mật độ tế bào VSV phân giải xenlulo
TT Chủng VSV
Mật độ tế bào hữu hiệu của các chủng VSV (cfu/ml)
0 vòng/phút 100 vòng/phút 150 vòng/phút 200 vòng/phút 1 CBK8 7,3.105 6,4.107 6,7.109 4,7.109 2 CBK11 7,6.105 5,8.107 6,6.109 4,9.109 3 CBK12 7,8.105 6,9.107 6,9.109 4,9.109
Qua số liệu bảng 3.9 cho thấy mật độ tế bào của các chủng VSV phân giải xenlulo ở các tốc độ lắc khác nhau có sự biến động rất lớn. Ở tốc độ lắc 150 vòng/phút mật độ VSV đạt mật độ cao nhất 6,6-6,9.109 cfu/ml và cao hơn so với mật độ ở 3 tốc độ lắc còn lại. Trong khi đó mật độ để tĩnh chỉ đạt 7,3- 7,8. 105cfu/ml.
Xác định thời gian nhân sinh khối phù hợp
Kết quả thí nghiệm về ảnh hưởng của thời gian nhân sinh khối đến mật độ tế bào VSV sinh màng nhầy được trình bảy ở bảng 3.10.
Bảng 3.10: Kết quả thí nghiệm ảnh hưởng của thời gian nhân sinh khối đến mật độ tế bào
TT Chủng VSV
Mật độ tế bào của các chủng VSV (cfu/ml)
24 giờ 48 giờ 72 giờ 96 giờ 120 giờ
1 CBK8 4,5.103 7,5.105 6,8.109 6,6.108 3,9.107
2 CBK11 4,8.103 7,7.105 6,6.109 5,7.108 3,8.107
3 CBK12 4,7.103 7,7.105 6,7.109 5,8.108 3,6.107
Qua số liệu bảng 3.10 cho thấy mật độ tế bào của các chủng VSV sinh màng nhầy tăng dần khi thời gian lắc tăng dần từ 24 giờ đến 48 giờ và đạt mật
độ cao nhất khi 72 giờ lắc, mật độ biến động từ 6,6-6,8.109 cfu/ml). Tuy nhiên mật độ tế bào của các chủng VSV giảm nhẹ sau 96 giờ và sau 120 giờ lắc mật độ chỉđạt 3,6 - 3,9.107 cfu/ml.
Xác định pH môi trường nhân sinh khối phù hợp
Kết quả thí nghiệm về ảnh hưởng của pH môi trường nhân sinh khối đến mật độ tế bào VSV phân giải xenlulo được trình bảy ở bảng 3.11.
Bảng 3.11: Kết quả thí nghiệm ảnh hưởng của pH môi trường đến mật độ tế bào
TT Chủng VSV
Mật độ tế bào của các chủng VSV (cfu/ml)
pH=4 pH=4,5 pH=5 pH=5,5 pH=6 pH=6,5 pH=7
1 CBK8 1,1.105 5,5.106 3,7.108 4,4.108 1,1.109 6,5.109 4,2.108
2 CBK11 3,3.105 6,4.106 1,1.108 1,5.108 2,9.109 6,0.109 8,2.108
3 CBK12 3,2.105 6,1.106 1,2.108 2,1.108 3,1.109 6,2.109 7,4.108
Qua bảng 3.11 cho thấy độ pH môi trường nhân sinh khối có ảnh hưởng khá lớn đến quá trình sinh trưởng và nhân lên của vi sinh vật, điều đó được thể hiện rõ ở mật độ tế bào hữu hiệu có trong 1 ml dung dịch mà chúng tồn tại. Trong môi trường có độ pH thấp, mật độ tế bào trong 1 ml dung dịch tương đối thấp, chỉ đạt 1,1-3,3105 cfu/ml. Các chủng vi sinh vật đều cho mật độ tế bào lớn đạt đến 109 ở điều kiện pH môi trường 6,0-6,5. Ba chủng (CBK8; CBK11, CBK12) đạt mật độ cao nhất ở pH môi trường là 6,5 mật độ tế bào từ 6,0-6,5 cfu/ml.