L ỜI CAM Đ OAN
3.3.4 Kết quả hướng dẫn xây dựng Quy trình sản xuất chế phẩm sinh học
Bước 1: Chuẩn bị nguyên vật liệu
- Mùn hữu cơ phơi khô loại bỏ tạp chất và tránh nấm mốc sàng và đóng bao sẵn; apatit phơi khô nghiền nhỏ.
Bước 2: Hoạt hóa giống
Để có được các giống khỏe thích nghi tốt với điều kiện nuôi cấy tiến hành hoạt hóa giống. Chuẩn bị các ống thạch nghiêng (có nút bông) có chứa môi trường PDA. Khử trùng môi trường thạch trong ống nghiệm ở 1210C, thời gian 30 phút. Khi môi trường còn nóng (60-700C), đặt nghiêng 300để cho thạch tạo thành mặt phẳng nghiêng. Cấy giống từ ống giống gốc sang ống thạch nghiêng mới chuẩn bị. Nuôi VSV ở tủ định ôn ở thang nhiệt độ 250C trong khoảng 96 giờ, tới khi thấy chủng phát triển tốt thì cấy vào môi trường nhân giống cấp 1, các thao tác cấy truyền được thực hiện trong tủ cấy vô trùng.
Môi trường PD lỏng: Môi trường PD lỏng bao gồm: 20g D-Glucose; 200g khoai tây; Nước cất 1000ml.
Bước 3: Nhân giống cấp 1
Chuẩn bị các bình tam giác 250 ml (có nút bông), sấy tiệt trùng 1 giờ ở 1600C. Cho vào mỗi bình 200 ml môi trường PD lỏng, khử trùng môi trường nhân giống cấp 1 ở 1210C, thời gian 20 phút, để nguội về nhiệt độ phòng mới cấy giống. Cấy truyền 1 vòng que cấy từ ống giống mới vào môi trường nhân giống cấp 1. Các thao tác cấy truyền ống nghiệm vào bình tam giác được thực hiện trong tủ cấy vô trùng. Nuôi ở trên máy lắc với tốc độ 150 vòng/phút ở 250C trong 72 giờ ta thu được giống cấp 1.
Chuẩn bị các bình có dung tích lớn hơn cho môi trường PD lỏng, khử trùng môi trường nhân giống cấp 2 ở 1210C, thời gian 30 phút, để nguội về nhiệt độ phòng truyền giống cấp 1 vào bình, lắc 150 vòng/phút ở 250C trong 72 giờ.
Bước 4: Trộn hỗn hợp
Trộn hỗn hợp chế phẩm
- Thành phần hỗn hợp bao gồm: Mùn hữu cơ, apatit, vi sinh vật sinh phân giải xenlulo.
+ 80% mùn hữu cơ (0,8kg) + 10% apatit (0,1 kg)
+ 10% chủng dịch vi sinh vật Phân giải xenlulo (0,1 kg)
- Kỹ thuật trộn: Cho mùn và apatit vào máy trộn, bật cho máy trộn hoạt động sau đó cho từ từ từng loại dịch, VSV phân giải xenlulo vào đến khi các loại vi sinh vật được trộn đều.
Bước 5: Bảo quản chế phẩm: Chế phẩm được đóng gói và bảo quản ở nhiệt độ phòng.