Pha động 1 Pha động 2 Pha động 3 Pha động 4 Pha động 5
RT1 4,820 5,235 4,760 5,580 4,820
RT2 6,089 7,487 6,025 6,489 5,889
RT3 9,95 10,95 9,350 9,250 8,950
W2 1,468 1,468 1,468 1,368 1,468
W3 1,585 1,985 1,885 1,485 2,385
R12 0,902 1,601 0,899 0,723 0,759
R23 2,529 2,005 1,983 1,935 1,589
Tốc độ dịng lớn nhất có thể được áp dụng trong bất kỳ bước sắc ký trao đổi ion cụ thể nào, tốc độ dịng qua cột sắc ký cũng có thể thay đổi giữa các giai đoạn tách khác nhau của chu trình sắc ký. Các ion được rửa giải nhanh hơn khi tốc độ dòng chảy dung dịch rửa giải cao, nhưng tốc độ rửa giải nhanh hơn sẽ làm giảm hiệu quả phân tách. Tốc độ dòng chảy cũng bị giới hạn bởi độ bền áp suất của cột.
Tốc độ dòng chảy tối đa được xác định bởi chạy thử nghiệm phân tích trực diện được thực hiện với một số tốc độ dòng chảy khác nhau: 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 ml/phút theo chế độ chạy đẳng dòng. Điều kiện tối ưu sẽ phụ thuộc vào yêu cầu về tốc độ và dung lượng trong hệ thống. Tùy thuộc vào mục đích phân tích, nếu tốc độ, thời gian phân tích mẫu được ưu tiên khi sự biến đổi chất phân tích trong mẫu diễn ra nhanh, gây bất lợi khác trong q trình phân tích thì tốc độ dịng chảy cao hơn có thể được sử dụng. Nếu mẫu phân tích ít có khả năng bị biến đổi trong thời gian dài, có thể sử dụng pha động với tốc độ dòng nhỏ để phân tách. Trong trường hợp áp suất ngược cao, do độ nhớt và bản chất của chát phân tích, có thể đặt giới hạn cho dịng chảy tối đa tỷ lệ trong q trình áp dụng mẫu.
Hình 3. 3 Mối tương quan của thời gian lưu anion khi tốc độ dòng thay đổi
0 2 4 6 8 10 12 14 16 0.3 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 Cl- NO3- SO42- Tốc độ dòng (ml/phút) Th ờ ig ia n l ư u (phút )
Lượng mẫu tối đa được xác định bằng cách chạy một loạt thử nghiệm với lượng mẫu tăng dần từ 10-50 µl. Điều kiện tối ưu sẽ là lượng mẫu tối đa cung cấp độ phân giải đủ cao peak chất phân tích để đáp ứng độ tinh khiết được xác định trước các yêu cầu.
Kết quả của quá trình khảo sát điều kiện tối ưu thiết lập các thơng số cho phương pháp phân tích anion cho thấy anion cần phân tích phân tách tốt đối với dung dịch pha động có nồng độ 2,7mM Na2CO3 /1 mM NaHCO3 với tốc độ dòng 0,75 ml/ phút với lượng thể tích mẫu bơm vào là 50µl.
3.2.2. Khảo sát điều kiện tối ưu thiết lập các thông số cho phương pháp phân tích cation pháp phân tích cation
Pha động rửa giải được chọn theo cột tách và detector. Loại khí các dung dịch rửa giải hoặc pha dung dung dịch rửa giải bằng nước đã loại khí. Tránh hấp thụ khí mới trong khi vận hành (ví dụ bằng thổi heli hoặc siêu âm). Giữ dung dịch rửa giải trong tối và thay mới khi cần. Theo các tài liệu tham khảo và điều kiện của máy, pha động tiến hành khảo sát bao gồm:
Dung dịch rửa giải axit metansunfonic: Hòa tan 1,3 ml dung dịch axit metansunfonic (CH4O3S) trong bình định mức 1000 ml và định mức bằng nước đã loại khí. Dung dịch chứa 0,02 mol/l axit metansunfonic, sử dụng trong 3 ngày kể từ ngày pha.
Dung dịch rửa giải axit nitric: Lấy 500 ml nước đã khử ion vào bình định mức 1000 ml, thêm 20 ml dung dịch axit nitric rồi thêm nước đến vạch. Dung dịch chứa 0,02 mol/l axit nitric, sử dụng trong vòng 3 ngày.
Nhiệt độ lò cột cũng là một trong các yếu tố gây ảnh hưởng đến độ phân tách của các chất. Nhiệt độ ảnh hưởng đến độ dẫn điện của pha động, của chất phân tích khi đi qua cột. Nếu nhiệt độ quá cao sẽ làm xuất hiện các tín hiệu nhiễm ở đường nền, gây ảnh hưởng đến độ lặp lại của quá trình phân tích. Thơng thường nhiệt độ lị cột sẽ thường đặt cao hơn nhiệt độ phịng phân tích 10oC. Để khảo sát tìm ra nhiệt độ lị cột tối ưu chúng tơi đã tiến hành các thí nghiệm với nhiệt độ lò thay đổi: 25oC, 35oC; 40oC; 50oC
Với mỗi một pha động thì khả năng phân giải của các peak cũng khác nhau. Tiến hành phân tích mẫu chuẩn, giữ nguyên các điều kiện, thay đổi pha động, từ đó tính ra độ phân giải của từng cation tương ứng với từng loại pha động.
Điều kiện chạy máy
Cột sắc kí: Shim-pack IC-SC1 (4.6mmx250mm) Tốc độ dịng: 0,75 ml/phút
Pha động: HNO3 nồng độ 20 mmol/l hoặc CH3SO3H 20 mmol/l Nhiệt độ: 40ºC
Detector: Detector độ dẫn
Kết quả khảo sát được thể hiện tại bảng 3.3 sau đây: