Kết quả phân lập các hợp chất

Mẫu vi nấm P.oxalicum CLC-MF05 sau khi được lên men sinh khối lượng lớn và chiết với ethyl acetate thu được 5.7g cao chiết tổng. Cao chiết này sau đó được rửa và lọc bằng methanol để tạo ra dung dịch hòa tan và phần cặn không hòa tan. Sau khi cô đặc, phần hòa tan methanol (1.7 g) được đưa vào được đưa vào sắc ký cột C18 pha đảo ngược (RP) (CC, 5 x 26 cm), rửa giải gradient lần lượt với các tỷ lệ dung môi tăng dần của methanol (MeOH) trong H2O từ 20:80 đến 100: 0 để thu được sáu phân đoạn F1 - F6.

Phân đoạn F3 được phân tách bằng sắc ký cột Sephadex LH-20 CC, rửa giải bằng hệ dung môi MeOH-H2O (4: 1, v/v) thu được 3 phân đoạn F3.1 – F3.3. Phân đoạn F3.3 sau đó được tách bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao bán điều chế, rửa giải gradient với hệ dung môi 45100% MeOH trong H2O (chứa 0,1% HCOOH) trong 60 phút thu được hợp chất 3 (2,1 mg, tR = 22,9 phút).

Phân đoạn F4 được phân tách qua cột Sephadex LH-20, sử dụng hệ dung môi rửa giải MeOH–H2O (4:1, v/v) thu được các phân đoạn F4.1-F4.3. F4.1 được tinh chế thêm bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao bán điều chế, sử dụng hệ dung môi rửa giải gradient 35100% MeOH trong H2O (0,1% HCOOH) trong 60 phút thu được hợp chất 1 (5,5 mg, tR = 23,2 phút). Tương tự, hợp chất 2 (2,1 mg, tR = 22,2 phút) được phân lập từ phân đoạn F4.1 bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao bán điều chế, sử dụng hệ dung môi rửa giải gradient 75100% MeOH trong H2O (chứa 0,1% HCOOH) trong 60 phút.

Như vậy, từ cao chiết tổng của chủng P.oxalicum CLC-MF05, sử dụng các phương pháp sắc ký kết hợp, kết quả thu được 3 hợp chất sạch (hình 3.3).

 Hằng số hóa lý của các hợp chất

 Oxaline (1)

Tính chất: Dạng bột, màu trắng

Phố khối lượng phân giải cao HR-ESI-TOF-MS: m/z 448.1982 [M+H]+,tính toán lý thuyết cho công thức: C24H26N5O4+, 448.1979

Hình 3.3: Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao chiết tổng

Penicillium oxalicum CLC-MF05 M: Methanol W: Nước CC: Sắc ký cột 2 2.1mg 40%M

Phần hoà tan MeOH 1.7g F1 F4.1 3 2.1mg 1 5.5mg 20%M 60%M 80%M 100%M DM=1:1 F3.1, F3.2 F2 F3 F4 F5 F6 F3.3 F4.2, F4.3 CC, Sephadex LH-20 MW 4/1 CC, Sephadex LH-20 MW 4/1 RP C18 (5 X 26cm) gradient MeOH-H₂O HPLC 45-100% MeOH HPLC 35-100% MeOH HPLC 75-100% MeOH

Cao chiết P.oxalicum CLC-MF05 5.7g

Dữ liệu phổ 1H NMR (400 MHz, CDCl3) và 13C NMR (100 MHz, CDCl3): được trình bày ở Bảng 3.1.

 Isorhodoptilometrin (2)

Tính chất: Dạng bột, màu cam

Thông số vật lý: HR-ESI-TOF-MS: m/z 337.0693 [M+Na]+, tính toán lý thuyết cho công thức: C17H14O6Na+, 337.0683

Dữ liệu phổ 1H NMR (400 MHz, CD3OD) và 13C NMR (100 MHz, CD3OD): được trình bày ở Bảng 3.2.

 5-hydroxy-7-(2’-hydroxypropyl)-2-methyl-chromone (3)

Tính chất: Dạng bột, màu vàng

Thông số vật lý: HR-ESI-TOF-MS: m/z 257.0796 [M+Na]+, tính toán lý thuyết cho công thức: C13H14O4Na+, 257.0784

Dữ liệu phổ 1H NMR (400 MHz, CD3OD) và 13C NMR (100 MHz, CD3OD): được trình bày ở Bảng 3.3.