Hình 3.4: Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC () và COSY (—) chính của hợp chất 1
Hợp chất 1 được phân lập ở dạng bột màu trắng. Công thức phân tử của hợp chất 1 được xác định là C24H25N5O4 thông qua sự xuất hiện của ion giả phân tử [M + H]+ tại m/z 448,1982 (tính toán lý thuyết cho công thức phân tử C24H26N5O4+ với số khối 448.1979).
Hình 3.5: Phổ HR-ESI-TOF-MS của hợp chất 1
Phổ 1H NMR của hợp chất 1 ghi nhận các tín hiệu của bốn proton thơm đặc trưng cho hệ spin AA'BB' tại H 7,59 (d, J = 7,6 Hz, H-4), 7,09 (t, J = 7,6 Hz, H-5), 7,29 (t, J = 7,6 Hz, H-6) và 6,98 (d, J = 7,6 Hz, H-7) cho thấy sự có mặt của một vòng benzene thế ở vị trí 1,2. Trên phổ 1H NMR của hợp chất 1 còn ghi nhận tín hiệu sáu proton olefin tại H 8,37 (s, H-15), 6,09 (br, H-22), 5,11 ( d, J = 18,4 Hz, Ha-23), 5,06 (d, J = 11,6 Hz, Hb-23), 7,71 (br s, H-18) và 7,29 (br s, H-20), hai nhóm methoxy tại H 3,72 (s) và 3,63 (s), và hai nhóm methyl bậc ba tại H 1,22 (6H, s, H3-24 và H3-25).
Phân tích phổ 13C NMR và DEPT-135 cho thấy 24 tín hiệu cacbon, bao gồm hai nguyên tử cacbon cacbonyl cộng hưởng ở C 165,8 (C-13) và 157,5 (C-10), một vòng thơm thế 1,2 [[C 125.8 (C-3a), 124.9 (C-4), 123.8 (C-5), 128.9 (C-6), 112.3 (C-7), 146.7 (C-7a)], một vòng imidazole [C 125,8 (C- 16), 136,9 (C-18) và 133,0 (C-20)], hai nguyên tử cacbon bậc bốn tại C 52,5 (C-3) và 42,6 (C-21), và một nguyên tử carbon mang nitơ cộng hưởng ở C
101,4 (C-2).
Hình 3.7: Phổ 13C NMR (100 MHz, CDCl3) của hợp chất 1
Tiến hành so sánh dữ liệu 1H và 13C NMR của hợp chất 1 với dữ liệu của một hợp chất indolyl alkaloid đã biết là oxaline cho thấy kết quả hoàn toàn tương đồng, gợi ý rằng hai hợp chất có cùng cấu trúc hóa học [159] (Bảng 3.1). Tiến hành phân tích phổ 2D NMR, bao gồm HMQC, HMBC và COSY để khẳng định thêm cấu trúc của hợp chất 1. Trước tiên, phổ HMQC được phân tích để xác định các tương tác giữa proton và carbon của các nhóm CH, CH2, và CH3 (Hình 3.8).
Hình 3.8: Phổ HMQC (400 MHz, CDCl3) của hợp chất 1
Hình 3.9: Phổ HMBC (400 MHz, CDCl3) của hợp chất 1
Tiếp theo, phổ HMBC được sử dụng để khẳng định các vị trí trong phân tử (Hình 3.9). Theo đó, tương tác HMBC của tín hiệu tại H 3.63 với C
146.5 cho thấy vị trí của nhóm methoxy tại C-9. 5.11 (Ha-23) và 5.06 (Hb-23) tới 42.6 (C-21), từ 1.22 (H3-24 và H3-25) tới 52.5 (C-3), 42.6 (C-21), và 22.4 (C-24 và C-25) giúp khẳng định vị trí của nhóm 2-methylbut-3-en-2-yl tại vị trí C-3. Vị trí của vòng imidazole tại C-15 được khẳng định thông qua tương tác giữa 8.37 (H-15) và 133.0 (C-20).
Hình 3.10: Phổ COSY (400 MHz, CDCl3) của hợp chất 1
Cuối cùng, phổ COSY ghi nhận tương tác giữa các proton H-4/H-5, H5-/H-6, H6/H-7, và giữa H-22/H-23 giúp khẳng định thêm cấu trúc của hợp chất 1. Trên cơ sở các minh chứng phổ, hợp chất 1 được xác định là oxaline.
Bảng 3.1: Số liệu phổ 1H và 13C NMR của hợp chất 1
Vị trí C# Ca,b Ha,c (dạng peak, J = Hz) 2 101.6 101.4 3 52.6 52.5 3a 146.5 125.8 4 124.7 124.9 7.59 (d, 7.6) 5 123.3 123.8 7.09 (t, 7.6) 6 128.4 128.9 7.29 (t, 7.6) 7 112.0 112.3 6.98 (d, 7.6) 7a 146.6 146.7 8 107.0 106.8 5.13 (s) 9 126.0 146.5 10 157.3 157.5 12 123.1 123.1 13 166.1 165.8 15 109.7 110.1 8.37 (s) 16 126.2 125.8 18 136.4 136.9 7.71 (br s) 20 133.8 133.0 7.29 (br s) 21 42.5 42.6 22 142.8 142.8 6.09 (br) 23 113.9 114.4 5.11 (br d, 18.4) 5.06 (br d, 11.6) 24 24.1 22.4 1.22 (s) 25 23.7 22.4 1.22 (s) 26 55.7 55.8 3.63 (s) 27 65.2 66.5 3.72 (s)
# Ccủa oxaline đo trong CDCl3 [159], a CDCl3, b 100 MHz, c 400 MHz