CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.5. Đánh giá khả năng mang và phĩng thích thuốc của hệ copolymer
copolymer CP
2.2.5.1. Khả năng mang và phĩng thích thuốc PTX của hệ copolymer
Xác định khả năng mang PTX
Hàm lượng PTX chứa trong hệ nano được xác định bằng phương pháp HPLC với bước sĩng hấp thu lớn nhất ở 227 nm. Mẫu CP mang PTX được hịa
0,45 µm. Mẫu được tiêm trực tiếp vào máy HPLC với chương trình chạy của mục 2.2.3 nhằm xác định hàm lượng PTX cĩ trong mẫu.
Khảo sát khả năng giữ thuốc PTX của hệ CP trong mơi trường đệm Việc khảo sát khả năng phĩng thích thuốc PTX ở tỷ lệ 2% trong hệ copolymer CP được thực hiện bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao.
Xác định nồng độ Paclitaxel nhả ra từ hệ copolymer CP, trong mơi trường PBS (phosphate-buffered saline) pH bằng 7,4 chuẩn bị 1 mL mẫu hệ copolymer CP ở 6000 ppm trong đĩ nồng độ PTX trong mẫu 120 ppm.
Sau đĩ cho vào màng thẩm tách 3,5 kDa, thẩm tách trong 10 mL dung dịch PBS, ở điều kiện 37 °C và khuấy từ 50 vịng/phút. Sau mỗi khoảng thời gian khác nhau 0h, 0,5h, 3h, 6h, 24h; 48h hút ra 2 mL dung dịch PBS cĩ chứa PTX đã được phĩng thích, sau đĩ cho vào 2 mL PBS mới vào bình thẩm tách để đảm bảo thể tích dung dịch khơng bị thay đổi. Lượng PTX phĩng thích ra được tính theo cơng thức:
Trong đĩ:
- Q : Lượng PTX được nhả ra từ nanogel - Ct : Nồng độ ở thời điểm thứ t
- V : Tổng Thể tích của đệm PBS - Vi : Thể tích PBS được thay thế
- Ci : Nồng độ PTX nhả ra tại thời điểm i
2.2.5.2. Khả năng mang và phĩng thích thuốc QU của hệ copolymer
Xác định khả năng mang QU
Hàm lượng quercetin chứa trong hệ nano được xác định bằng phương pháp quang phổ tử ngoại UV- Vis (Agilent 8453 UV-Vis Spectrophotometer) với bước sĩng hấp thu lớn nhất ở 374 nm. Quercetin tinh khiết được hịa tan trong ethenol : D2O (1:1) với các nồng độ 0-5 ppm để dựng đường chuẩn, mẫu được cho vào cuvet, đặt cuvet vào máy Agilent 8453 UV-Vis
Spectrophotometer và tiến hành đo mẫu. Kết quả khảo sát độ tuyến tính của QU được trình bày ở bảng 2.3.
Bảng 2.3. Kết quả khảo sát độ tuyến tính của QU Dung dịch chuẩn Nồng độ (mg/L) Độ hấp thụ (Abs) Dung dịch chuẩn Nồng độ (mg/L) Độ hấp thụ (Abs)
1 0 0 2 0,5 0,035 3 1,0 0,076 4 1,5 0,114 5 3,0 0,226 6 5,0 0,380
Phương trình hồi quy y = 0,07602x – 8.14927.10-4
Hệ số tương quan R² = 0.9999
Hình 2.4. Đồ thị biểu diễn tỉ lệ giữa nồng độ QU và độ hấp thụ Khảo sát khả năng giữ thuốc QU của hệ CP trong mơi trường đệm Khảo sát khả năng giữ thuốc QU của hệ CP trong mơi trường đệm Xác định nồng độ QU nhả ra từ hệ copolymer CP trong mơi trường PBS (phosphate-buffered saline), pH bằng 7,4 chuẩn bị 1 mL mẫu hệ copolymer CP
kDa, thẩm tách trong 10 mL dung dịch PBS, ở điều kiện 37 oC và khuấy từ 50 vịng/phút, mỗi mẫu lặp lại 3 lần để đảm bảo độ tin cậy. Sau mỗi khoảng thời gian khác nhau 0h, 0,5h, 3h, 6h, 24h; 48h hút ra 2 mL dung dịch PBS cĩ chứa QU đã được phĩng thích, sau đĩ cho vào 2 mL PBS mới vào bình thẩm tách để đảm bảo thể tích dung dịch khơng bị thay đổi. Lượng QU phĩng thích ra được tính theo cơng thức:
𝑄 = 𝐶𝑛𝑉𝑠 + 𝑉𝑡∑ 𝐶𝑛−1
𝑛−1
𝑖=1
Trong đĩ:
- Q: lượng QU được giải phĩng từ nanogel lũy tuyến - Cn: nồng độ ở thời điểm t.
- Vs: thể tích của PBS - Vt: thể tích mẫu.