Thời gian (phút) %A %B
1 50 50
3 50 50
10 5 95
9 5 95
2.2.3.1. Chuẩn bị dung dịch chuẩn và dung dịch thử PTX
- Dung dịch chuẩn gốc 100 mg/L: Cân chính xác 1 mg mẫu PTX chuẩn, cho vào bình định mức 10 mL, thêm khoảng 3 mL dung mơi methanol, lắc đều. Siêu âm trong 20 phút. Thêm dung mơi methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều để yên trong 5 phút.
- Mẫu thử 50 mg/L: Cân chính xác 0,5 mg mẫu chứa PTX, cho vào bình định mức 10 mL, thêm khoảng 3 mL dung mơi methanol. Lắc đều, siêu âm 20 phút. Thêm Methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, để lắng 5 phút. Lọc qua màng lọc 0,45 µm.
- Mẫu chuẩn 50 mg/L: Hút 5 ml dung dịch chuẩn gốc 100 mg/L thêm vào bình định mức 10 mL, thêm dung mơi methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, để yên trong 5 phút. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 μm.
2.2.3.2. Khảo sát tính tương thích hệ thống
Cách tiến hành:
- Cân bằng cột sắt ký bằng pha động trong 60 phút. - Tiến hành sắc ký mẫu chuẩn 50 mg/L, 6 lần liên tiếp
- Tính độ lệch chuẩn tương đối (%RSD) của các thơng số trên theo cơng thức: x SD RSD % Trong đĩ:
- % RSD: độ lệch chuẩn tương đối, để biểu diễn sự sai lệch giữa các dữ liệu
- SD: Độ lệch chuẩn, phản ánh độ phân tán của các dữ liệu
1 ) ( 2 n x x SD i x: giá trị trung bình Yêu cầu:
- Độ lệch chuẩn tương đối % RSD của diện tích peak: ≤ 2,0 % - Độ lệch chuẩn tương đối % RSD của thời gian lưu: ≤ 2,0 %
- Số đĩa lý thuyết của đỉnh chính N: ≥ 2000.
- Giá trị trung bình của Hệ số khơng đối xứng T: ≤ 2,5 (13)
2.2.3.3. Độ đặc hiệu
Cách tiến hành:
Chuẩn bị 3 mẫu dung dịch: mẫu trắng, mẫu thử, mẫu chuẩn:
- Mẫu trắng: Chuẩn bị 20 mL dung mơi methanol. Lọc qua màng lọc 0,45 μm.
- Mẫu thử 5 mg/L: Hút 2 ml dung dịch thử 50 mg/L thêm vào bình định mức 20 mL, thêm dung mơi methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, để yên trong 5 phút.
- Mẫu chuẩn 50 mg/L.
Yêu cầu:
- Sắc ký đồ mẫu trắng khơng cho peak ở trong khoảng thời gian lưu tương
ứng với thời gian lưu của chất chuẩn.
- Sắc ký đồ mẫu thử cho peak cĩ thời gian lưu tương tự với peak của chất
chuẩn trong sắc ký đồ mẫu chuẩn.
- Trên sắc ký đồ mẫu thử, nếu cĩ xuất hiện thêm các peak khác peak của chất cần phân tích (peak tạp), thì các peak tạp này phải tách hồn tồn với peak của chất cần phân tích đồng thời đáp ứng các yêu cầu chung của phương pháp sắc ký lỏng được quy định.
2.2.3.4. Khảo sát khoảng tuyến tính