Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Khi tiến hành chạy sắc ký, các chất phân tích được phân bố liên tục giữa pha động và pha tĩnh. Trong hỗn hợp các chất phân tích, do cấu trúc phân tử và tính chất hóa lý, ái lực với pha động và pha tĩnh của các chất khác nhau, nên khả năng tương tác của chúng với pha tĩnh và pha động khác nhau. Do vậy, chúng di chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau. Tín hiệu được truyền đến detector để nhận dạng, tùy thuộc vào bản chất hóa lý của chất phân tích mà lựa chọn detector cho phù hợp như: Detector quang phổ hấp thụ phân tử (UV/VIS), detector huỳnh quang (RF), detector độ dẫn, và detector khối phổ (MS). Phương pháp HPLC là một phương pháp thông dụng để xác định các hợp chất hữu cơ. Tuy nhiên, phương pháp có độ nhạy kém khi sử dụng detector quang phổ hấp thụ phân tử, còn khi sử dụng detector huỳnh quang phương pháp có độ nhạy tốt hơn nhưng chỉ có thể nhận biết chất phân tích thông qua thời gian lưu. Đối với những nền mẫu phức tạp, các chất phân

tích rất dễ bị ảnh hưởng bởi nền mẫu, nếu chỉ dựa vào thời gian lưu sẽ rất khó để có thể khẳng định chất cần phân tích.

Trong nghiên cứu trước đây của Elvira Grou và các cộng sự [54] 10 TTS thuộc nhóm carbamate trong đó có fenobucarb trong các mẫu đất và nước đã được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng detector quang phổ hấp thụ phân tử (HPLC/UV) ở bước sóng 254 nm, các mẫu nước được chiết lỏng-lỏng với dichloromethane, các mẫu đất được làm sạch bằng cột florisil. Dịch chiết sau đó được đem cô quay đến cạn, hòa cặn bằng 1mL methanol, sau đó chuyển sang vial và đo trên HPLC/UV. Giới hạn phát hiện của phương pháp này là từ 0,005 - 0,01 µg/L đối với mẫu nước, từ 0,05 - 0,1 µg/g đối với mẫu đất. Tác giả Feng Tang và cộng sự [55] đã xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamate trong rau bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao (HPLC) tại 2 bước sóng  = 243 nm và  = 207 nm. Phương pháp có hiệu suất thu hồi từ 70,13 - 103,7% tại nồng độ 1 - 5 µg/g. Feride và các cộng sự [56] đã sử dụng phương pháp HPLC detector huỳnh quang để xác định đồng thời các chất carbamate như aldicarb, propoxur, carbofuran, carbaryl và methiocarb trong mật. Mẫu được chiết bằng methanol và cho qua cột florisil để làm sạch. Sử dụng dung môi dicloromethane : hexane = 1 : 1 để rửa giải các chất carbamate ra khỏi cột. Dịch rửa giải cô quay ở 40C đến cạn và hòa cặn bằng 1mL acetonitrile và đo trên HPLC. Phương pháp có giới hạn phát hiện thấp từ 4 - 5 µg/g và độ thu hồi tương đối cao từ 72,02 - 92,02% ứng với nồng độ từ 50 - 200 ng/g.