(Radio Immuno Assay, RIA)
Kỹ thuật này lợi dụng tớnh chất đặc hiệu cao của cỏc phản ứng miễn dịch, kết hợp với độ nhạy cao của cỏc thiết bị đo đếm hạt nhõn. Chỳng cho phộp xỏc định được những lượng chất rất bộ (khoảng 10-9gam). Kỹ thuật RIA được ỏp dụng để đỏnh giỏ và thăm dũ chức năng của cỏc tuyến nội tiết, mụ hay phủ tạng của cơ thể.
Nguyờn tắc của kỹ thuật này là đưa vào ống nghiệm hay thành phần của chất phản ứng: khỏng nguyờn (antigen: Ag) là chất cần phõn tớch và khỏng thể (antibody: Ab) là chất phản ứng. Cỏc khỏng nguyờn được dựng trong hai dạng: dạng được đỏnh dấu bằng một đồng vị phúng xạ (ký hiệu Ag*) và dạng khụng được đỏnh dấu (ký hiệu Ag). Ag và Ag* cạnh tranh với nhau để liờn kết với Ab. Những khỏng nguyờn nào liờn kết với khỏng thể sẽ ở trạng thỏi liờn kết (ký hiệu B: bound). Những khỏng nguyờn nào khụng liờn kết được sẽ ở trạng thỏi tự do (ký hiệu F: free). Quỏ trỡnh đú cú thể được diễn tả bằng sơ đồ sau:
Cỏc thành phần liờn kết và tự do cú thể được tỏch riờng ra bằng nhiều phương phỏp khỏc nhau. Sau đú người ta đo độ phúng xạ của Ag* trong trạng thỏi liờn kết và trong trạng thỏi tự do, giả sử được cỏc kết quả B* và F*, từ đú ta lập tỉ số B*/(B*+F*) và B*/F*. Cỏc tỉ số này dĩ nhiờn sẽ bằng cỏc tỉ số tương ứng của Ag khụng phúng xạ B/(B+F) và B/F, vỡ cỏc phản ứng húa học khụng phõn biệt được cỏc đồng vị phúng xạ với cỏc đồng vị khụng phúng xạ.
B*/(B*+F*) = B/(B+F) B*/F* = B/F
Như vậy, cỏc chất đỏnh dấu phỏt ra tia phúng xạ cú thể được ứng dụng để đo tỉ lệ liờn kết cỏc khỏng nguyờn.
Trong một quy trỡnh RIA tiờu biểu, thường người ta lập cỏc đường cong diễn tả tỉ số B/(B+F) và B/F theo nồng độ của Ag (hỡnh vẽ). Sau đú, khi cần đo hàm lượng khỏng nguyờn trong một mẫu thử, ta đo tỉ số B/(B+F) hay B/F của khỏng nguyờn cú trong mẫu thử, rồi dựng cỏc đường cong này để xỏc định nồng độ khỏng nguyờn.