Tất cả các hoá chất sử dụng trong luận văn đều thuộc loại tinh khiết hoá học hoặc tinh khiết phân tích, nớc cất hai lần.
2.2.1. Dung dịch gốc Fe3+ (10-3M)
Cân chính xác 0,270g FeCl3.6H2O kim loại tinh khiết trên cân phân tích,
bình định mức một lít, lắc đều, rồi định mức đến vạch ta đợc dung dịch Fe3+ 10-3M.
Các dung dịch Fe3+ có nồng độ bé hơn đợc pha từ dung dịch này. Nồng độ dung
dịch Fe3+ đợc kiểm tra lại nồng độ bằng phơng pháp chuẩn độ complexon với
EDTA 0,1M dùng chỉ thị axit sufosalixilic.
2.2.2. Dung dịch gốc Streptomycin (10-3M)
Cân chính xác 0,1457g streptomycin, sau đó hoà tan hoàn toàn bằng nớc cất, chuyển vào bình định mức 1 lít, tráng cốc, thêm nớc cất hai lần tới vạch, lắc kĩ
ta đợc dung dịch chuẩn streptomycin (10-3M). Các dung dịch có nồng độ thấp hơn
đợc pha loãng trớc khi dùng.
2.2.3. Dung dịch NaOH (1M)
Cân 4g NaOH, hoà tan hết trong cốc thuỷ tinh, chuyển vào bình định mức 100 ml và định mức tới vạch bằng nớc cất hai lần, lắc kĩ ta đợc dung dịch NaOH (1M). Các dung dịch có nồng độ thấp hơn đợc pha loãng trớc khi dùng.
2.2.4. Dung dịch hoá chất khác
Dung dịch NaNO3 1M sử dụng để điều chỉnh lực ion à = 0,1 đợc pha chế
bằng cách cân chính xác một lợng NaNO3 theo tính toán ứng với nồng độ 1M, hoà
tan và chuyển vào bình định mức, thêm nớc cất hai lần đến vạch và lắc đều.
Các dung dịch sử dụng để điều chỉnh pH: NaOH và HNO3 với các nồng độ
khác nhau đợc pha chế từ lợng cân và thể tích tơng ứng.
2.3. Cách tiến hành thí nghiệm 2.3.1. Chuẩn bị mẫu phân tích
Mẫu thịt cần phân tích đợc thái nhỏ, nghiền mịn, trộn đều và cân 1 lợng a = 20g cho vào máy xay sinh tố. Thêm 10 ml nớc cất vào và cho máy chạy trong 5 phút. Cho 5 ml axit clohydric 1 M vào và định mức đến 50 ml bằng nớc cất. Đun trong bếp cách thủy sôi trong 10 phút. Để nguội ly tâm lắng cặn, lấy dung dịch n- ớc trong cho vào phễu chiết, thêm 10 ml clorofooc, lắc trong 10 phút sau đó để yên trong 15 phút cho phân lớp hoàn toàn trong phễu chiết rồi tách lấy tớng hữu cơ vào phễu chiết khác, thêm 2 ml NaOH 1M và 4ml thuốc thử sắt (III) trong axit và
nớc cất đến 20 ml. Lắc mạnh trong 30 phút, sau đó để yên trong 20 phút rồi tách lấy phần dung dịch nớc. Dung dịch này dùng để đo mật độ quang, xác định streptomycin ở bớc sóng 525 nm.
2.3.2. Pha dãy chuẩn
Dùng dung dịch gốc tiêu chuẩn của streptomycin sunfat nồng độ 1mg/ml, tính toán lợng phù hợp để pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ 0,1 – 0,5 – 1,0
– 1,5 - 2,0 – 2,5 àg/ml trong các bình định mức có thể tích 20 ml sau đó thủy
phân bằng kiềm, đun cách thủy cho sôi 10 phút, để nguội rồi cho 2 ml dung dịch thuốc thử phèn sắt (III) amoni 1%, định mức bằng nớc cất đến 20 ml rồi để sau 20 phút mới tiến hành đo.
2.3.3. Mẫu trắng
Mẫu trắng phải đợc chuẩn bị cùng một điều kiện nh mẫu phân tích nhng thay thể tích mẫu bằng thể tích nớc cất tơng ứng.
+ Nghiên cứu các điều kiện tối u cho sự thủy phân streptomycin tạo ra
maltol nh : thời gian thủy phân, nhiệt độ, nồng độ NaOH.
+ Nghiên cứu hiệu ứng tạo phức giữa Fe3+ với maltol.
+ Nghiên cứu các điều kiện tối u cho sự tạo phức nh: thời gian tạo phức tối - u (tt), pH tối u (pHt), nồng độ thuốc thử tối u...
+ Xác định thành phần, cơ chế phản ứng và các tham số định lợng của phức (hệ số hấp thụ phân tử, hằng số bền điều kiện...), khảo sát khoảng nồng độ tuân theo định luật Beer.
+ áp dụng kết quả nghiên cứu vào việc xác định d lợng streptomycin trong thịt lợn.
2.3.4. Tiến hành thử
+ Đặt sóng đo và bật máy chạy cho ổn định (5 phút).
+ Đo mật độ quang của mẫu chuẩn và mẫu phân tích ở bớc sóng 525 nm bằng cuvét có chiều dày 1 cm. Dùng mẫu trắng ở kênh so sánh làm mẫu so sánh và đo mỗi mẫu 3 lần.
+ Lập đồ thị đờng chuẩn theo hệ tọa độ A – C. Trong đó A là mật độ quang của dung dịch mẫu chuẩn có nồng độ C tơng ứng.
+ Xác định nồng độ Cx của chất phân tích theo đờng chuẩn đã dựng đợc.
2.3.5. Tính kết quả
Hàm lợng của streptomycin trong mẫu phân tích đợc tính theo công thức sau : 0 . x C V C a = Tính bằng mg/kg Trong đó: a là lợng mẫu cân V là thể tích pha mẫu (V=25ml) 2.4. Xử lý các kết quả thực nghiệm
+ Giản đồ phân bố các dạng tồn tại của Fe3+, thuốc thử maltol đợc xử lý
bằng phần mềm đồ hoạ Matlab 7.2.
+ Cơ chế phản ứng tạo phức, phơng trình đờng chuẩn và các tham số định l- ợng của phức đợc tính toán, xử lý trên máy tính bằng chơng trình descriptive statistic, regression trong phần mềm Ms - Excel.
Chơng 3
Kết quả thực nghiệm và thảo luận