Nguyờn tắc:
Phương phỏp này dựa vào sự hỡnh thành cỏc dẫn xuất pyrole khi glucosamin được đun núng trong thuốc thử 2,4 pentadion. Những pyrole này sẽ cho phản ứng màu với thuốc thử Erlich I theo phản ứng sau:
Phương phỏp này chỉ xẩy ra khi đun núng thuốc thử. Elson và Morgan đó sử dụng phản ứng này trong phương phỏp so màu để xỏc định hàm lượng glucosamin. Đường amin hydrochlorid được đun núng với 2,4 pentadion trong dung dịch kiềm khoảng 1 giờ trước khi thờm thuốc thử Erlich I. Những lượng tương đương glucosamin cho ra những cường độ màu tương đương ở cựng điều kiện.
Dựng đường chuẩn glucosamin
Cõn chớnh xỏc 0,5g N- acetyl- D - Glucosamin, cho vào nước cất đủ 1000 ml.
Từ dung dịch này, pha cỏc dung dịch glucosamin chuẩn cú nồng độ 10 - 250 àg/ml
Nồng độ glucosamin chuẩn (
àg/ml) 0 10 50 100 150 200 250
Thể tớch dung dịch
glucosamin (ml) 0 2 10 20 30 40 50
Thể tớch nước cất (ml) 100 98 90 80 70 60 50
Dựng đường chuẩn biểu diễn sự tương quan giữa nồng độ glucosamin và giỏ
trị ∆OD.
Thớ ngiệm:
- Chọn cỏc bỡnh định mức 25ml
- Cho vào bỡnh định mức 25ml: 1ml dịch thớ nghiệm, 2ml thuốc thử acetyl acetol
- Thờm 2ml thuốc thử Erlich I, lắc đều, đem đun cỏch thủy ở 70oC trong 20 phỳt.
- Để nguội bỡnh định mức, cường độ màu đỏ xuất hiện và được tiến hành đo bằng mỏy đo mật độ quang ở bước súng từ 450 - 600 nm
- Nồng độ glucosamin dịch thủy phõn xỏc định dựa vào đường chuẩn glucosamin.
Hỡnh 2.2. Cường độ màu ở cỏc nồng độ khỏc nhau