3. ðỐ IT ƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG
3.5.4 Phương phỏp xỏc ủịnh sự lan truyền của virus khảm ủốm gõn lỏ ớt (ChiVMoV) qua ghộp cõy
(ChiVMoV) qua ghộp cõy
3.5.4.1 Thiết kế thớ nghiệm
Phương phỏp xỏc ủịnh sự lan truyền của virus khảm ủốm gõn lỏ ớt (ChiVMoV) qua ghộp cõy dựa theo tài liệu mụ tả của Green (1991)[37].
Cõy thuốc lỏ Nicotiana spp. ủược dựng trong thớ nghiệm ghộp cõy. Cõy dựng ủể ghộp cú cựng ủộ tuổi và chếủộ chăm súc là như nhau.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………27
Thớ nghiệm gồm cú 3 cụng thức. Mỗi cụng thức ghộp 5 cõy. Thiết kế thớ nghiệm theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiờn (completely randomized design - CRD).
- CT1: Ghộp cành thuốc lỏ nhiễm ChiVMoV lờn gốc ghộp thuốc lỏ khoẻ. - CT2: Ghộp cành thuốc lỏ khoẻ lờn gốc ghộp thuốc lỏ nhiễm ChiVMoV. - CT3: Ghộp cành thuốc lỏ khoẻ lờn gốc ghộp thuốc lỏ khoẻ.
3.5.4.2 Phương phỏp ghộp cõy
Dựng dao lam ủó ủược khử trựng cắt ủoạn cành ghộp ở phần ngọn cõy cú chiều dài khoảng 7-10 cm, cuối cành ghộp cắt vỏt chộo một gúc 40 - 450. Phần mang gốc ghộp cũng cắt vỏt tương tự như ủoạn cành ghộp nhưng ngược chiều nhau. Sau ủú, ộp hai mặt cắt của cành mang ủoạn ghộp và gốc ghộp vào với nhau, rồi dựng dõy nilon mỏng màu trắng cố ủịnh chỗ ghộp nối. Cuốn dõy nilon cho kớn vừa hết chỗ ghộp nối. Sau mỗi cụng thức khỏc nhau thỡ thay dao lam mới.
ðưa cõy ủó ghộp vào trong buồng ẩm nhằm trỏnh chỗ ghộp nối bị khụ. Cỏc chỉ tiờu theo dừi: Tỷ lệ bệnh (%), triệu chứng bệnh và thời kỳ tiềm dục.
3.5.5 Phương phỏp xỏc ủịnh sự lan truyền của virus khảm ủốm gõn lỏ ớt
(ChiVMoV) qua hạt giống
Tiến hành lõy nhiễm ChiVMoV lờn một số giống ớt cay và thuốc lỏ ở
giai ủoạn 12 - 14 lỏ thật. Mỗi giống lõy 15 cõy. Cỏch ly hoàn toàn cõy ủó lõy nhiễm. Chăm súc cho cõy lớn ủể cú thể ra hoa và kết trỏi ủược. Sau ủú, thu cỏc hạt từ cỏc quả chớn sinh lý của cỏc cõy lõy nhiễm ChiVMoV ủể tiến hành làm cỏc thớ nghiệm khỏc.
3.5.5.1 Thớ nghiệm lõy nhiễm ChiVMoV lờn cõy chỉ thị
Thu toàn bộ hạt trong quả trờn cõy ủó nhiễm ChiVMoV, 10 quả/giống. Nghiền hạt bằng chày cối sứủó ủược khử trựng trong ủệm 0,01M Phosphate, pH 7,0.
Cõy thớ nghiệm: thuốc lỏ Nicotiana tabacum cv. Samsun, N. tabacum
cv. White Burley, N. tabacum cv. Xanthi - nc và ớt cay Capsicum frutescens
cv. Red Chilli.
Cỏch tiến hành lõy nhiễm tương tự như mục 3.5.2.3.
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………28
3.5.5.2 Thớ nghiệm gieo hạt giống từ cõy nhiễm bệnh
Thu lấy hạt của quả chớn sinh lý trờn cõy nhiễm ChiVMoV. Mỗi giống gieo 300 hạt vào khay trồng cú lỗ gieo hạt. Khay trồng cú 104 lỗ, gieo 1 hạt/lỗ. Cõy thớ nghiệm ủể trong nhà lưới chống cụn trựng.
Giỏ thể dựng ủể gieo hạt giống tương tự như mục 3.5.2.1.
Chỉ tiờu theo dừi: Tỷ lệ cõy mọc (%), tỷ lệ cõy cú biểu hiện triệu chứng bất bỡnh thường (%) và quan sỏt cỏc biến ủổi hàng ngày trờn cõy.