- Các bước chuyển gen cho hoa loa kèn trắng nhờ vi khuẩn
5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ
5.1 Kết luận
Từ những kết quả nghiên cứu ựã trình bày ở phần trên chúng tôi ựưa ra một số kết luận sau :
* Hoàn toàn có thể chuyển gen vào cây hoa loa kèn bằng vi khuẩn
Agrobacterium tumefaciens.
* Các thông số kỹ thuật của quy trình chuyển gen nhờ vector ITB2c mang các gen Gus, Bar, CryIA(c) vào cây hoa loa kèn là:
- Callus là nguồn vật liệu tốt nhất cho quá trình chuyển gen vào cây hoa loa kèn nhờ vi khuẩn A.tumefaciens.
- Thời gian tiền nuôi cấy thắch hợp cho sự chuyển gen nhờ vi khuẩn
A.tumefaciens vào mô callus là 3 Ờ 5 ngày.
- Phương pháp cắt mẫu và lây nhiễm tốt nhất cho sự chuyển gen nhờ vi khuẩn A.tumefaciens vào mô callus là cắt trên giấy khô rồi ngâm mẫu trong dung dịch vi khuẩn 5 phút, sau ựó gắp mẫu ựể khô trên giấy thấm rồi cấy trên môi trường ựồng nuôi cấy.
- Thời gian ựồng nuôi cấy mẫu với vi khuẩn phù hợp nhất phục vụ cho quá trình chuyển gen vào mô callus là 3 ngày.
* đã ựánh giá ựược sự có mặt của gen chuyển vào bằng phương pháp PCR với cặp mồi cho 35S promoter và xác ựịnh ựược 16 dòng loa kèn có mang gen chuyển.
5.2 đề nghị
* Tiếp tục ựánh giá sự biểu hiện của gen chuyển vào bằng các kỹ thuật lai Southern Blot, Western Blot và các biotest ựể khẳng ựịnh sự biểu hiện ổn
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ68 ựịnh của các gen chuyển vào.
* Có thể áp dụng quy trình nêu trên ựể chuyển gen cho cây hoa loa kèn nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens. Tiếp tục nghiên cứu chuyển các gen triển vọng khác có các ựặc tắnh mới cho hoa loa kèn nhờ vi khuẩn
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ69
TÀI LIỆU THAM KHẢO A.Tài liệu trong nước A.Tài liệu trong nước
1. Nguyễn Thị Lý Anh, đinh Trường Sơn, Bùi Thị Mỹ Hạnh, Nguyễn Thị Hương (2007), ỘNghiên cứu chuyển gen GFP (Green Fluoresncent Protein) vào cây Lilium Oriental Hybrid ỘSiberiaỢ nhờ vi khuẩn A.tumefaciensỢ, Bác cáo Hội nghị khoa học: Công nghệ sinh học thực vật trong công tác nhân giống và chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp, trang 185-202.
2. Nguyễn Thị Lý Anh, đinh Trường Sơn, Nguyễn Thị Thanh Phương, Nguyễn Thị Hoa (2009), ỘNghiên cứu tái sinh in vitro và chuyển gen GFP (Green Fluoresncent Protein) vào cây hoa loa kèn (Lilium longgiflorum) nhờ vi khuẩn A.tumefaciensỢ, Tạp chắ khoa học và Phát triển 2009, Tập 7, số 2, 121 Ờ 129, Trường ựại học Nông Nghiệp Hà Nội.
3. đái Duy Ban, Lữ Thị Cẩm Vân (1994), Công nghệ gen và công nghệ sinh học dùng trong nông nghiệp hiện ựại, NXB Nông nghiệp.
4. Lê Trần Bình, Phan Văn Chi, Nông Văn Hải, Trương Nam Hải, Lê Quang Huấn (2003), Áp dụng các kĩ thuậtphân tử trong nghiên cứu tài nguyên sinh vật Việt Nam, NXB Khoa học và kĩ thuật.
5. Lê Trần Bình, PGS.PTS Hồ Hữu Nhị, PGS.TS Lê Thị Muội (1997), Công
nghệ sinh học thực vật trong cải tiến giống cây trồng. NXB Nông Nghiệp.
6. Võ Văn Chi, Dương đức Tiến (1978), Phân loại học thực vật, NXB đại học và Trung học chuyên nghiệp 1978.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ70 dục.
8. đặng Văn đông, đinh Thế Lộc (2003), Công nghệ mới trồng hoa cho thu nhập cao, quyển 3-Hoa Lily, NXB Lao ựộng-Xã hội.
9. Nguyễn Thị Hoa (2008) Nghiên cứu hệ thống tái sinh và chuyển gen GFP cho hoa loa kèn (Lilium longiflorum) nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, Báo cáo tốt nghiệp.
10. Nguyễn Thị Hương (2007), Nghiên cứu xây dựng hệ thống tái sinh in vitro trên cây hoa lily ỘSiberiaỢ và bước ựầu chuyển gen nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp.
11. Võ Kim Liên (2008), Nghiên cứu phương pháp chuyển gen cho cây hoa loa kèn (Lilium longiflorum) nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens,
Báo cáo tốt nghiệp.
12. Lê đình Lương (2001), Nguyên lý kỹ thuật di truyền, NXB khoa học và kỹ thuật - Hà Nội.
13. Lã Tuấn Nghĩa, Vũ đức Quang, Trần Duy Quý (2004), Cơ sở lý thuyết và ứng dụng công nghệ gen trong chọn tạo giống cây trồng, NXB
Nông nghiệp.
14. Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Phương Thảo.
ỘNghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống cây hoa loa kèn bằng kỹ
thuật tạo củ trong ống nghiệmỢ, Báo cáo Hội nghị khoa học toàn quốc 12/1999, NXB Nông nghiệp.
15. Dương Tấn Nhựt (1994), Nhân giống hoa huệ tây bằng phương pháp nuôi cấy vảy củ, Tạp chắ Sinh học 3/1994, tr 29-31.
16. đinh Thị Phòng, Nguyễn Thị Thư (2007), ỘChuyển gen gus vào ựỉnh sinh phôi hạt chắn giống ựậu tương đT12 thông qua A.tumefaciensỢ. Tạp chắ công nghệ sinh học, 5(4), 471-478.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ71 17. Nguyễn Quang Thạch, Bài giảng công nghệ sinh học thực vật, đại học
Nông nghiệp Hà nội.
18. Nguyễn Quang Thạch, (chủ biên), TS. Nguyễn Thị Lý Anh, TS. Nguyễn Thị Phương Thảo (2005), Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp.
NXB NN Ờ Hà Nội.
19. Nguyễn đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật Ờ Nghiên cứu và
ứng dụng, NXB NN Ờ Hà Nội
20. Nguyễn Thị Phương Thảo (1998), Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh một số giống hoa loa kèn nhập nội (Oriental Hybrid Lily) bằng phương pháp nuôi cấy in vitro, Luận văn Thạc sỹ Nông nghiệp.
21. Hoàng Thị Sản (1999), Phân loại học thực vật, NXB Giáo dục Ờ Hà Nội.
B.Tài liệu tiếng anh.
22. Hoshi Y. Và cộng sự (2005), Agrobacterium Ờ mediated transformation of Lilium longiflorum, Acta Horticulturae 673, vol 2: 543-547.
23. Ilcheva V. và cộng sự (1993), In vitro plant regeneration in some bulb species, 29A,3, Pt.2,72A.
24. In-Hae Park, Hee-Sung Park (2002), ỘLily pollen growth in vitro and Agrobacterium Ờ mediate Gus gene transformation via Vacuun- Infiltation.JỢ, Plant Biotechnology.
25. Kim Sung Su và cộng sự( 2007), Transient β-glucuronidase expression in lily ( Lilium longflorum L.) pollen via wounding-assisted Agrobacterium - mediated transformation, J. Biotechnology Letters, vol 29, Number 6 / June, 2007, pp. 965-969
26. Lipsky A., A.Cohen, V.Gaba, K.Kamo, A.Gera, A.Watad (2002),
Transformation of Lilium longiflorum plants for cucumber mosaic virus resistance by particle bombardment, Proc. 10th. IS Virus Diseases
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ72 Ornamentals, Ed. J. Hammond Acta Hort 568: 209-214.
27. Mercuri A. và cộng sự (2003), Agrobacterium-Mediated transformation with rol genes of Lilium longiflorum Thunb, ISHS Acta Hoticluturae
612, XXI International Eucarpia Symposium on Classical versus Molecular Breeding of Ornamentals - Part I.
28. Sakae Suzuki and Masaru Nakano, (2002), Agrobacterium-Mediated
transformation in Liliaceous ornamental plants, JARQ 36(3), 119-
127(2002).
29. Stimart, Ascher (1978), Tissue culture of bulb scale section for axexual propagation of Lilium longiflorum Thunb, Hortic Science, 103, 182-184.
30. Watad A.A. và cộng sự (1998), ỘMicroprojejcttile Bombardment Ờ mediate
transfomation of Lilium longiflorumỢ, Plant cell report, 262-267.